妇科补肾益精颗粒的含量测定方法学验证

摘要 目的：本研究旨在对医院制剂“妇科补肾益精颗粒”的含量测定法进行方法学验证。方法：通过HPLC（按《中国药典》2020年版四部通则0512）测定法对该方法的专属性、稳定性、重复性、耐用性进行验证。结果：专属性、稳定性、重复性、耐用性良好。结论：通过对该制剂的含量测定法的验证，提升了“妇科补肾益精颗粒”的临床应用的安全性。

关键词：妇科补肾益精颗粒；高效液相色谱法；质量标准；方法学验证

近年来，国家发布了一系列政策文件促进中医药传承创新发展[1-2]。本制剂处方来源于遵义市中医院临床经验方，由当归、白芍、熟地黄等17味组成。诸药合用共奏补肾益精，疏肝健脾之功效，常用于肝郁肾虚所致的月经量少等病症[3-5]。

本文将通过高效液相色谱法对院内制剂“妇科补肾益精颗粒”的质量标准的含量测定法进行方法学考察[6]。“妇科补肾益精颗粒”原处方主要功效为补肾益精，疏肝健脾。临床实践证明该处方在临床使用中没有明显的不良反应及毒副作用，但原方未进行系统的工艺和质量控制标准研究，难以保障医院协定处方的质量和临床疗效。因此，本项目将按照《贵州省医疗机构制剂研究技术指导原则》（中药、民族药）（试行）等要求[7-8]，以芍药苷做含量测定，并对其方法进行验证，保障制剂的质量可控，临床疗效的稳定。

1.实验器材

1.1实验仪器

LC-2010AHT全自动高效液相色谱仪；Shimadzu Libror AEL 40SM；HH-4数显恒温水浴锅；超声波清洗机；电子天平（型号BSM-220.4，AB-135-S）。

1.2实验材料

妇科补肾益精颗粒（批号：20240603、20240605、20240607）；芍药苷对照品（批号：110736-202246）由中国食品药品检定研究院提供；试剂：甲醇、乙腈；纯化水；甲醇；磷酸、磷酸二氢甲。

2测定方法

2.1色谱条件的选择

（1）色谱柱：参照《中国药典》2020年版白芍药材含量测定，选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱进行考察，柱温30℃。结果表明用该柱子的分离效果较好。

（2）流动相：经过实验摸索，采用①乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相和②甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾（40∶65）为流动相。结果显示：流动相①能使待测成分芍药苷与其他杂质较好的分离且峰形较好。

（3）检测波长：参照《中国药典》2020年版白芍药材中芍药苷含量测定项，选择芍药苷的检测波长为230nm。

（4）理论塔板数：根据不同品牌色谱柱测定结果及参照《中国药典》2020年版白芍药材中芍药苷的含量测定项，理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于2000。

2.2对照品的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80µg的溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品，研细，取细粉约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟 ，放冷再称定重量，用稀乙醇醇补足减失的重量，摇匀滤过，取续滤液，即得。

3方法学验证

（1）专属性  取该制剂（批号：20240603）样品及阴性对照按供试品溶液制备法制备样品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液注入液相色谱仪，供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应的位置上有相应的色谱峰，且阴性无干扰。

（2）稳定性试验   取该制剂（批号：20240603）样品，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液。在室温下每隔一段时间进样10µl，照上述色谱条件测定，测定峰面积，求相对标准偏差，结果表明，该样品在24小时内稳定（RSD=0.4%），结果见下表1。

（3）重复性试验  取该制剂（批号：20240603）样品，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定芍药苷的含量，结果见下表2，说明有较好的重复性。

（4）耐用性

采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，分别测定了该制剂（批号：20240603）中芍药苷的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。含量测定结果见下表3。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。

7.4样品测定  取3批中试样品，按质量标准草案方法测定其中芍药苷含量（结果见表4）。

总结：基于对该方法进行验证，该制剂（批号：20240603、20260605、20240607）；参照《中国药典》2020年版中白芍药材的含量测定方法对该制剂质量标准草案进行方法学验证。通过对芍药苷供试品、对照品、阴性对照比较分析，专属性：相应位置出现相应色谱峰，阴性无干扰。稳定性：该样品在24小时内稳定性良好。重复性：通过制备6份供试品溶液。按照上述色谱条件对连翘苷的含量进行了测定，RSD=0.7%，说明有较好的重复性。耐用性：通过使用不同品牌十八烷基键合硅胶填充剂的色谱柱进行芍药苷含量测定，RSD=1.9%，结果不受影响。

综上所述，通过对院内制剂妇科补肾益精颗粒的质量标准中含量测定方法的各参数进行验证评估，说明该含量测定方法对妇科补肾益精颗粒的含量检验稳定可靠，并按《中国药典》2020年版“白芍”含量测定项下芍药苷含量不得少于1.2%的规定，理论上推算出本制剂中芍药苷含量限度不得少13.9mg/g，并对该制剂的质量控制标准进行系统的研究，提升了质量标准，保障制剂生产的质量可控，临床疗效稳定。

参考文献

[1]马尔丽.中国医院制剂的历史、现状和发展策略[J].中国药 事，2007，21（9）：713-715.

[2]陈盛新，晏马成，蒯丽萍，等.我国医院制剂未来走向探讨[J].中国药房，2004，15（11）：646-648.

[3]李小青，张亚玲，朱燃培，等.经方当归芍药散的历史沿革及现代临床应用概况[J].中国中医基础医学杂志，2023，29（11）：1942-1947.

[4]翟欣然.基于古今医案的当归芍药散证治规律研究[D].黑龙江中医药大学，2023.

[5]郑淑晶. 桂枝芍药知母颗粒的开发研究[D]. 导师：王淑敏. 长春中医药大学， 2022.

[6]程梦珍. 经典名方芍药甘草汤物质基准的研发[D]. 南京中医药大学， 2021

[7]国家药品监督管理局.关于换发《医疗机构制剂许可证》工作安排的通知.国药管安[2000]275号.

[8]沈文娟，张珂良，汪丽，等.对我国医疗机构制剂管理现状的思考[J].中国药事，2012，26（4）：321-323.

基金项目：“补肾益精”经验方的医疗机构制剂研发（遵市科合HZ字（2022）437号）

作者简介：周小波（1980—），男，贵州遵义人，副主任中药师，主要从事中药质量标准研究。