RP-HPLC 测定盐生肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷的含量

盐生肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，主产于内蒙古、甘肃、青海等地，新疆、陕西、宁夏也有分布。其茎细小圆柱形，鳞叶卵形至矩圆状披针形，横切面中柱维管束排列成深波状。它属于多寄主植物，常见寄主有盐爪爪、囊果碱蓬等，最近发现甜菜也是其寄主。历代本草记载肉苁蓉原植物为荒漠肉苁蓉和盐生肉苁蓉二种，中国药典收载荒漠肉苁蓉，其主要化学成分为松果菊苷和麦角甾苷等苯乙醇苷类成分，含量与品种和寄主有关。本文用 RP-HPLC 法测定 2 个不同批次盐生肉苁蓉中这两种成分含量，为评价其质量提供依据。

1. 仪器与试剂

试剂与试药 : 松果菊苷与麦角甾苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号 : 松果菊苷对照品批号为 111670-200401，麦角甾苷对照品批号为111530-200505）。甲醇为色谱甲醇，乙腈为色谱纯，水为超纯水；其它试剂均为分析纯。盐生肉苁蓉一批来自安国市场一批来自锡林郭勒盟西北部 。经鞠爱华教授鉴定为列当科肉苁蓉属盐生肉苁蓉。

仪器 : 美国 Agillent1100 高效液相色谱仪。

2. 色谱条件

Kromasil C18 色谱柱；流动相：乙腈－甲醇－ 1% 醋酸溶液（9:14:77）；检测波长为 334nm 。理论板数按松果菊苷计算应不低于 5000

3. 对照品溶液的制备

精密称取松果菊苷对照品和麦角甾苷对照品适量，分别加流动相制成每1ml 约含松果菊苷 0.14mg 和麦角甾苷 0.10mg 的溶液，即得。

4. 供试品溶液的制备

取本品粉末 ( 过 60 目筛 ) 约 1g，精密称定，置 100ml 锥形瓶中，精密加入流动相 25ml ，称定重量，浸泡0.5 小时，超声处理50 分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，过滤，静置，取上清液置棕色容量瓶中，即得。

5．实验条件的选择

5．1 提取条件的选择：本实验参照药典的提取方法，经实验研究，用超声提取的方法，被测成分提取完全，且杂质干扰少，结果理想，提取条件比较结果见表1 ：

实验结果中虽然加热回流 50 分钟这种方法测得的含量最高，但由于它的杂质干扰多，且峰形不好，故选择超声50 分钟。

5．2 流动相的选择：参照药典及有关文献，比较了两组流动相①乙腈－甲醇 -1% 醋酸溶液（9:14:77） ② 甲醇 -1% 甲酸（21.5:78.5）。结果表明：以①流动相出峰时间适中，色谱峰峰形理想，杂质少，且分离度好。故选择以乙腈－甲醇 -1% 醋酸溶液（9:14:77）为流动相。

6．方法学考察

6．1 系统适应性试验

分别取各对照品，供试品溶液，按各自色谱条件进样测定，记录色谱图。松果菊苷和麦角甾苷保留时间分别约为 13min 和 39min .

6．2 线性关系考察

6．2．1 松果菊苷线性关系考察：精密称取松果菊苷标准品 6.45mg 于10ml 容量瓶中用流动相定容，精密吸取 0.1ml 、 1.0ml 、 1.5ml 、 2.0ml 、 2.5ml 、3.0ml 置 5ml 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别吸取 20ug 进样，按上述色谱条件测定。结果峰面积与进样量之间呈现良好的线性关系，回归方程为Y=2141.5x-35.72 R=0.9999（Y 为峰面积积分值，X 为进样量）。

结果表明，松果菊苷的量在（ 0.0258mg～0.774mg ）范围内，含量与吸收峰面积线性关系良好。

6．2．2 麦角甾苷线性关系考察：精密称取麦角甾苷标准品 3mg 于 5ml 容量瓶中用流动相定容，精密吸取 0.05ml 、 0.25ml 、 0.5ml 、 1.0ml 、 1.25ml 置 2ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别吸取 20ug 进样，按上述色谱条件测定。结果峰面积与进样量之间呈现良好的线性关系，回归方程为 Y=4065.6x+159.35 R=0.9999（Y 为峰面积积分值，X 为进样量）。

结果表明，麦角甾苷的量在（ 0.030mg～0.750mg ）范围内，含量与吸收峰面积线性关系良好。

6．3 精密度试验

取盐生肉苁蓉粉末 1g，精密称定，按样品制备方法操作制备供试品溶液，连续进样6 次，测得松果菊苷和麦角甾苷的峰面积积分值。

供试品峰面积的 RSD 分别为 1.44% 和 0.99% 。结果表明，仪器等整个检测系统的精密度良好。

6．4 稳定性试验

取盐生肉苁蓉样品1g，按样品制备项下方法制备供试品溶液，分别于0、1、2、4、8 以及12 小时进样，样品峰面积的RSD 分别为 1.18% 和 1.48% ，说明供试品溶液在12 小时内稳定。

6．5 重复性试验

取同一批次盐生肉苁蓉粉末 6 份，精密称定，每份取样量约为 1g 。分别按样品制备方法制备并测定每份的含量。结果表明，药材中松果菊苷和麦角甾苷含量测定的 RSD 分别为 1.72% 、 1.45% ，说明供试品分析的结果稳定，表明该方法的重复性良好。

6．6 加样回收试验

取同一批次盐生肉苁蓉粉末 6 份，精密称定，每份取样量约为 0.75g 每份约加入松果菊苷对照品 1.26mg 和麦角崽苷对照品 1.31mg_⨀ 。分别按样品制备方法制备并测定每份的含量。结果平均回收率分别为 102.23% 、 103.92% . 说明该方法可行。

6．7 样品测定

分别取不同产地批次的供试品，按“4. 供试品溶液的制备”项下的方法操作并测定，结果见表2 ：

由于产地不同，样品中松果菊苷和麦角甾苷的含量差异很大。

【讨论】

1．松果菊苷和麦角甾苷这 2 种苯乙醇苷类都是易分解的成分，对强光较敏感，所以对照品保存时应冷冻避光同时样品制备后应及时测定，以免影响测定结果。

2. 用流动相甲醇 -1% 甲酸（21.5:78.5）测定时 , 松果菊苷的峰形、分离度、比用流动相已腈－甲醇 -1% 醋酸溶液（ 9:14:77 ）的更好，且杂质更少，含量更高。因此，单独测定松果菊苷含量时用流动相甲醇 -1% 甲酸（21.5:78.5）效果更好。

3. 由于时间关系只测定了两批盐生肉苁蓉。以后有机会会继续进行对盐生肉苁蓉的研究。

【参考文献】

[1]．2020 版《中国药典》( 一部 ) 第 140 页。

[2]．陈敏，肖苏萍，崔光红，张思巨，吴志刚黄璐琪，刘铭庭。《管花肉苁蓉中松果菊苷和麦角甾苷的含量测定》。中国中药杂志第30 卷第11 期。