高效液相色谱法定量分析在化学原料药生产过程中运用分析

前言：在化学原料药生产期间加强质量控制，要求在确定原料药结构组成的前提下，明确原料药中的杂质含量，进而规划采取针对性的措施，对生产工艺进行优化，对化学原料药生产期间可能出现的杂质问题进行控制，以此来保障化学原料药的质量稳定性。基于此，探讨高效液相色谱法定量分析的作用，对促进化学原料药生产工艺优化调整，提升原料药质量水平具有积极的意义。

一、高效液相色谱法与化学原料药生产

（一）高效液相色谱法

高效液相色谱法需要将样品溶液注入到装有固定相的色谱柱中，在洗脱剂的作用下，让作为流动相的洗脱剂与固定相之间相互作用，依据样品中各个具体组成部分的性质特点不同，在色谱柱中将具体的组成部分相互分离，进而依据色谱柱中呈现的颜色变化形式，确定样品溶液中的具体成分。实际应用该方法，需要事先对样品进行预处理，应用溶剂萃取、固相微萃取等方法，将样品从复杂基质中分离出来，并经过净化处理，去除其中的杂质，提高分析纯度[1]。必要时还需要对样品进行固相微萃取富集等操作，用于提高检测的灵敏度与分辨率。

（二）化学原料药生产概况

为便于对化学原料的生产质量控制进行研究，本文在分析中，具体选择核苷类似物这类抗病毒性原料药进行研究。结合化学工业的生产情况，明确该类化学原料药，主要用于核苷类似物治疗、抗病毒以及提高免疫和恢复肝功能。为保障这类化学原料药的高纯度和质量效果，在化学原料药的生产期间，需要积极探索定量分析的方法，支持对整个原料药生产过程的高效监测，重点保障这类原料药的抗病毒活性。

二、高效液相色谱法定量分析在化学原料药生产过程中的运用

在简单介绍化学原料药生产情况与高效液相色谱法应用原理的前提下，具体可以从以下几方面入手，探讨定量分析方法在化学原料药生产中的应用情况：

（一）实验准备与原料药生产过程

在实验规划准备阶段，应用的材料具体涉及 2^⋅ -脱氧胸苷、4， 4^⋅ -双甲氧基三苯甲基氯、砒啶、4-二甲氨基砒啶、丁二酸酐、dT-02、dT-P、水、醋酸铵等。

在制备合成dT-02 时，需要将 70g 的2-脱氧胸苷与700ML 的干燥砒啶充分融合，将混合物降温至零下 10^∘C 后，称取 105g 的 DMTrCl 加入到混合物中。将其放置在室温条件下，持续搅拌 5h 。在减压蒸馏除去砒啶后，剩余的残留物需要溶解在 3.0L 的二氯甲烷中，再以质量分数为 5% 的碳酸氢钠溶液对其进行洗涤。洗涤得到的产物需要以无水硫酸钠进行干燥处理，终可以得到 124g 左右的产品。

制备合成dT-P 时，则需要将事先制备的 20g 的 dT-02，与 100mL 二氯甲烷进行充分混合，再向其中加入 5.75g 的 4-二甲氨基砒啶、 4.71mg 的丁二酸酐，将得到的混合物放置在室温环境下搅拌过夜，依次应用碳酸氢钠溶液与无水硫酸钠进行洗涤和干燥处理，在经过真空蒸发后，可以得到 23g 左右的产品。

（二）定量分析

在以高效液相色谱法进行定量分析时，应事先做好对色谱条件的优化。确定色谱柱、流动相、流动相梯度洗脱程序、流速、柱温、紫外检验波长以及进样量的大小。在选择检测波长时，以待分析物的最大吸收峰位置为依据，要求确保吸收峰基线平稳状态，且实际检测期间受到的噪声干扰较少。在选择流动相时，要求重点考虑有机相与水相的不同情况。常用于定量分析的有机相，以正乙烷、甲醇、乙腈为代表。本文在实验中主要选择乙腈作为有机相，这类有机相在紫外光区域的吸收相对较小，可以保证紫外检测的灵敏度效果[2]。而在选择水相时，考虑不同类型水相在定量分析中的进样情况，明确以 10mL 的醋酸氨水溶液进行检测，可以让检测获得的图谱基线处于平滑状态，且各峰的分离度均超过 2，能够呈现出更显著的分离效果。

而在溶液配置期间，需要称取一滴 0.5mg 左右的第一步反应液，向其中加入 0.5mL 水淬灭后，以乙腈将其稀释至 1mL 。然后称取 0.5mg 的第二步反应液，以 0.5mL 的甲醇淬灭，再利用乙腈将其稀释至 1mL ，以此制备反应中控液。制备对照品溶液时需要分别称取 2-dT、dT-P 各 25mg ，向其中加入少量稀释剂，经过超声溶解和定容处理后，达到容量瓶的刻度位置。制备混合对照品溶液时，则需要分别称取 dT-02、dT-P、砒啶、DMT-Cl、2-dT 各 25mg ，以少量水稀释并进行超声溶解，在经过定容后达到容量瓶的刻度。

在定量分析期间，要求在制备反应中控液时，在反应初始的一小时之内，按照间隔15 分钟的标准依次进行取样监控，而在反应超过一小时后，则需要控制间隔监控的时间为30 分钟。记录参数以反映时间、原料与产品面积比为主，经过实验分析后发现，在反应时间不断延长的情况下，原料逐渐减少，产品逐渐增多，则代表实验应用的高效液相色谱法，可以实现对化学原料药合成生产过程的在线监控与检测。

对高效液相色谱法线性关系的定量分析，规划按照溶液配置的相关要求，获得用于实验分析的溶液样品后，将溶液稀释为 4% （ 40μg/mL ）、20% （ 200μg/mL ）、 40% （ 400μg/mL ）、 50% （ 500μg/mL ）、 60% （600μg/mL ）、 80% （ 800μg/mL ）、 100% （ 1000μg/mL ）7 个不同浓度的溶液。对这些不同浓度下的溶液进行进样检测。以样品检测的浓度、峰面积值作为构建线性回归曲线的依据，再依据回归曲线构建回归方程，以此判断化学原料药质量浓度与峰面积之间是否呈现出良好的线性关系。

在分析高效液相色谱法的专属性时，应在按要求配置对照品溶液后，称取 1mL 未破坏母液，向其中加入 1mL 浓度为 1.0mol/L 的盐酸溶液，将其放置在室温环境条件下3h 后，再向其中加入浓度为 1.0mol/L 的氢氧化钠溶液，负责对溶液的pH 值进行调节。期间，还需要配置酸破坏空白溶液作为实验对照。而在碱处理过程中，则需要先向对照品溶液加入氢氧化钠溶液，在室温条件下放置3h 后，再加入盐酸溶液，对 pH 值进行调节。然后需要对得到的溶液进行氧化处理，向 1mL 未破坏母液加入质量分数为 0.3% 的 1mL 双氧水，在摇匀后，按同样方法放置 3h 。高温处理则需要将 1mL未破坏母液放置在 60^∘C 的环境下进行处理。做好以上准备后，运用色谱方法进样，得到针对化学原料药的强制降解实验色谱图，以此明确化学原料药在强酸、强碱、氧化以及高温等不同环境下的降解情况与程度，从而验证高效液相色谱法的专属性。

结论：综上所述，高效液相色谱法定量分析方法的应用，能够满足对化学原料药生产过程进行质量控制的目标和要求。在明确不同类型化学原料药基本性质与生产工艺情况的前提下，以定量分析方法进行化学原料药生产情况的研究，应重点围绕化学原料药生产期间的反应中控、线性关系等内容进行研究，并验证定量分析结果，是否符合原料药生产的实际情况，以此为化学原料药生产加工提供参考。

参考文献：

[1]张新,黄存影,马德龙,等.防老剂 N2-苯基吡啶-2,5-二胺的高效液相色谱法定量分析[J].橡胶科技,2025,23(05):288-291.

[2]赵军星.高效液相色谱法定量分析工业废水中正丁醇[J].精细化工中间体,2022,52(03):82-84.