基于高效液相色谱法的罗红霉素胶囊药物含量检测技术

引言：目前，罗红霉素胶囊含量检测方法包括微生物检定法、紫外分光光度法和高效液相色谱法等。微生物检定法虽能反映抗菌活性，但操作繁琐、周期长且重复性差；紫外分光光度法简便但专属性不足，易受辅料干扰。高效液相色谱法凭借分离效率高、专属性强、灵敏度高及结果稳定等优势，逐渐成为药物含量检测的主流方法。

1.仪器与试药

1.1 仪器

本次研究所选用的仪器是FI 本岛津生产的EssentiaLC 一15C 高效液相色谱仪，包括LC-15C送液单元、SPD-I5C紫外可见双波长检测器、SIL-1OAF自动进样器，CTO-15C~温箱／储液盒、德国赛多利斯生产I~BP211D 型分析天平、上海生析超声仪器有限公司生产的DS-151ODTH 型号超声清洗器。

1.2 试药

对照品选用中国药品生物制品检定所的罗红霉素胶囊（批号130644-200804，纯度 97.0% ）；供试品为江苏亚邦爱普森药业生产的罗红霉素胶囊（批号 1103033、1103034、1103035，规格 150mg/粒）。试剂方面，色谱纯乙腈、分析纯三乙胺购自上海凌峰化学试剂有限公司，分析纯磷酸二氢铵来自天津金汇太亚化学试剂有限公司，无水盐酸、醋酸钠购自南京化学试剂有限公司，超纯水为自制。

2.方法与结果

2.1 试剂的配制

在进行流动相制备时，通过称量获取 7.17g 磷酸二氢铵，并加入超纯水使其溶解，再完成 1000mL 定容，最终获得 0.067mol/L 浓度的磷酸二氢铵溶液。并添加 1mL 三乙胺，使 pH 值变为6.5，随后与乙腈按照65:35 的比例混合，以 0.45μm 滤膜过滤，再进行15 分钟的超声脱气。

此外，在对照品储备液制备这时，应取 25mg 罗红霉素对照品，精密称取好，将其置于 25mL 容量瓶中，加入流动相进行溶解，随后定容至刻度，制成浓度为 1mg/mL 的储备溶液，而后准确量取该储备液 s_mL ，置于50mL 容量瓶中，以流动相补足体积，得到含 100μg/mL 成分的对照品溶液，于 4^∘C 冷藏，以备后续使用。

2.2 色谱条件

色谱条件采用的是C18 色谱柱，将 0.067mol/L 磷酸二氢铵溶液用三乙胺调 pH 到 6.5，随后与乙腈按 65:35 的比例混合作为流动相，将流速设置为 1.0mL/min ，将柱温调控至 30^∘C ，将检测波长定为 210nm ，进样时采用20μL 的体积。

并以此为基础进行检测，罗红霉素峰保留时间在适合范围，与相邻杂质峰的分离程度均超过1.5，基于罗红霉素峰计算结果，理论塔板数不低于3000，拖尾因子在0.95-1.05 范围，系统适用性试验各指标均达到要求。在完成对一组不同浓度对照品溶液的检测后，应绘制标准曲线，结果发现其线性关系表现良好，相关系数超过 0.999 。由此可以得知，该色谱条件下方法的特异性、精密度、准确性及稳定性均符合罗红霉素胶囊含量测定要求，能够应用在供试品的检测环节。

2.3 测定方法

取适量罗红霉素对照品备用，将对照品加入流动相溶解，经过定量稀释制得系列浓度溶液，另择适量供试品内容物称取，依照相同方法制备供试品溶液，对两种溶液分别进行精密量取，各取 20μL 注入高效液相色谱仪，依照先前所讲的色谱条件开展测定，将色谱图记录留存。

将对照品浓度作为横坐标，采用峰面积作为纵坐标绘制标准曲线，借由外标法算出试品中罗红霉素的含量，对照品于特定浓度区间呈现出良好线性关联，相关系数超过 0.999，试品测定所得结果的相对标准偏差小于2.0% ，平均回收率在 98.0%-102.0% ，说明此方法准确可靠，可对罗红霉素胶囊的含量进行测定。

2.4 线性关系

在进行线性关系考察时，精准量取罗红霉素对照品若干，并在严格称定后，借助流动相溶解并开展定量稀释，得到浓度各异的对照品溶液，虽然依照前面设定好的色谱条件，精确量取各浓度的溶液，随后注入高效液相色谱仪，记录各浓度溶液对应峰面积。

将对照品浓度设为横坐标，取峰面积为纵坐标实施线性回归分析，设定好的浓度范围中，罗红霉素峰面积跟浓度呈现良好的线性关联，回归方程显现出极高的拟合效果，相关系数超过0.999，说明此方法在该浓度范围可精准对罗红霉素进行定量分析，达到罗红霉素胶囊药物含量检测对线性关系设定的条件，为后续精准测定供试品奠定可靠基础。

2.5 稳定性试验

在进行稳定性试验线性关系考察时，取一定量罗红霉素对照品，准确称定后，用流动相溶解且定量稀释，制备出一套浓度有别的对照品溶液，将这些溶液于不同条件下静置特定时长后，依照前面的色谱条件，分别精密量取后注入高效液相色谱仪，记下相应峰面积。

将对照品浓度作为横坐标，以峰面积作纵坐标开展线性回归分析，罗红霉素处于所设定的浓度区间内，经不同放置条件后，峰面积与浓度仍呈现良好的线性相关，回归方程的相关系数超过0.999，体现出在试验考察的稳定性条件中，该方法的线性关系展现出稳定性，可精准对不同放置时长的罗红霉素进行定量分析，符合稳定性试验中线性关系的需求，为罗红霉素胶囊稳定性研究的定量分析予以可靠支持。

2.6 罗红霉素胶囊含量测

以优化的该高效液相色谱法进行罗红霉素胶囊含量测定，分别从三批供试品里各取20 粒，倾出内容物，进行混合操作，精密称取相当于罗红霉素 150mg 的那部分内容物，添加流动相经超声处理溶解，经滤过取续滤液，精确量取供试品溶液以及浓度达 100μg/mL 的对照品溶液各 20μL ，注入色谱仪，采用外标法计算含量。

对于批号 1103033，含量为标示量 98.6% ，批号 1103034 测得含量为101.2% ，对于批号 1103035，含量为 99.8% ，均在规定的 90.0%110.0% 范围内，经对三批样品测定，结果的相对标准偏差分别为 0.7%. 、 0.9% 、 0.8% ，说明该方法有准确测定罗红霉素胶囊含量的能力，说明其重复性良好。

3.讨论

本研究建立的高效液相色谱法检测罗红霉素胶囊含量，经方法学验证，线性关系、精密度、准确度及稳定性均符合要求，能有效分离罗红霉素与辅料及杂质，确保检测结果可靠。实际检测三批供试品含量均在规定范围内，且偏差较小，表明该方法适用于罗红霉素胶囊的质量控制。相较于传统方法，其分离效率高、分析速度快，可满足批量样品检测需求。不过，实验中发现超声时间对样品溶解影响较大，需严格控制；同时，不同品牌色谱柱可能影响分离效果，后续可进一步优化色谱条件，扩大样品检测范围，提升方法适用性与稳定性，为罗红霉素胶囊质量监管提供更有力支持。

参考文献：

[1]张郅,陈嘉科,徐洋等.高效液相色谱测定布洛芬药物制剂含量方法的优化[J].化学分析计量,2024,33(3):23-28

[2]全迎新,邓代武,金彪等.高效液相色谱法测定复方氨基酸胶囊(8-11)中氨基酸的含量[J].延边大学学报（自然科学版）,2023,49(1):83-88