木棉花中高效液相色谱法定量方法的研究

木棉［ Gossam pinus malabarica (DC.)Merr ］为木棉科（Bombacaceae）木棉属（Gossmpinus）植物。别名：红棉、攀枝花、英雄树（广东）。英文名：Common Bombax。以花入药，木棉花味淡，涩，平，具有清热，除湿，解毒的功效［4］。分布于两广，云南，海南等地区，是海南常见树种之一，临床应用在两广地区比较广泛，海南多以观赏为主。X是天然的多酚类化合物之一可以从知母、芒果果实、漆树科植物的叶子和树皮、鸢尾科植物的花和叶子中提取，通过临床的药理生物学的研究表明，X有诸多的化学方面的重要生理活性和重要的药理作用，具有抗氧化、抗炎、抗病毒，保护肝胆，抗癌等药理作用［1-3］

目前对木棉花的研究，只有化学成分的分析，药理活性作用研究，药典标准中木棉花的检验只有显微，对照药材的薄层，因此本课题对木棉花中活性成分X的含量测定进行研究。

仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津高效液相色谱仪（LC-20A）德国塞多利斯集团SartorisBS224S电子天平，KUDOS超声波清洗器。

1.2 试药

对照品 X (含量： 98.1% 111607-201704) 来自中国食品药品检定研究院，甲醇，乙腈，磷酸色谱纯，其他试剂为分析纯。

高效液相色谱法:色谱柱安捷伦C18( 5μm, ， 4.6mm×250mm )，紫外λ=258，流动相甲醇- 0.02% 磷酸， 1ml/min ，进样量为 10μm 。将收集到 10 批木棉花，参照木棉花中《中国药典》2020 年版一部P65,薄层鉴别，依法测定，结果如下。

1：木棉对照药材；2-4：样 2-4；

4.6mm×250mm 的色谱柱，结果表明，两个柱子的重现新良好。

对照品的制备:精密称取对照品 X=14.859 ，至 50ml 容量瓶定容，用甲醇超声溶解并定容，得到 0.29718mg/ml 对照品溶液。

线性关系的考察:精密量取对照品母液 5ml 至 20、25、50、100、200 容量瓶中，用容量瓶加甲醇定容至刻度，按每次 10μl 的进样量对每个配制好的对照品溶液平行进样一次，以峰面积为纵坐标，对照品 X 的浓度为横坐标，绘制工作曲线。回归方程为Y=(4.35914+007)X,线性范围 0.00297⋅0.29718mg/ml ，线性相关系数为 0.9999，线性关系良好。

X 对照品；6-11: 样 5-10,样 1；12：木棉对

结果表明，样品色谱中，在与木棉花对照药材色谱相应的位置上，日光下显示相同颜色的斑点，紫外光下显示相同颜色的荧光斑点。

测定波长的选择:取X加适量甲醇溶解，用高效液相色谱PDA检测器进行全波长采集， 时，可以检测出来，供试品的制备:提取方法和时间的选择,甲醇回流和超声分别 30 和 60 分钟，依法测定，甲醇回流含量最高，回流 60 与 30min 差异不大，选择回流 30min提取溶剂的选择,将木棉花粉至细粉，精密称取 1g粉末 5 份，分别加 ① 甲醇 ②70% 甲醇 ③50% 甲醇 ④ 乙醇 ⑤ 稀乙醇各 25ml ，称定重量，超声 30min ，放冷后再称定重量，过滤。依法测定，结果表明 70% 甲醇提取出来的X含量最高，

提取溶剂量的考察:取木棉花两份，分别加入 70% 甲醇， 25ml 和 50ml ，依法测定，结果表明 25ml和 50ml提取的量相近，最终选择 25ml 。

色谱柱的选择:选择色谱柱安捷伦C18( 5μm ， 4.6mm×250mm )和Waters C18(5μm，

精密度试验:取对照品X（ 0.05946mg/ml) ），连续进样 6 次，对照X平均峰面积为2752482， RSD=1.6% 。,仪器精密度高。

稳定性试验:取新制的供试品，分别于 1、3、6、12、24h进样 10μl ，测定木棉花中的X的平均含量为 1.2mg/g 。 RSD=1.4 RSD值较低，说明试验有良好的重复性。

回收率试验:取 6 份同一批的木棉花样品，分别加入对照品 0.5911mg ，制备测定液并进行含量测定，结果表明，加标回收率平均值为 96% ， RSD=2.7

不同地区木棉花的含量。

分别取广东，广西两批，海口三批，昌江，琼海，陵水，三亚

讨论

提取方法的选择：选用超声和回流两种提取方法，时长 30min 和 60min ，两种方法得到的结果，回流 30min样品提取最高，溶剂的选择：选择甲醇， 70% 甲醇， 50% 甲醇，乙醇以及稀乙醇作为溶剂，提取木棉花结果表明 70% 甲醇提取含量最高。陵水收集的木棉花缠绕着大量的棉絮，或许对结果有影响。不同地区采集的木棉花含量差异大 ,可能跟木棉花的生长环境，发育年限是否有关,2022 年采集的木棉花,海口地区的有红色和橙红色两种，考察两种花的含量差异,木棉大树和小树的含量差异大

结论

综上所述:木棉花中高效液相色谱法定量方法简便快捷，准确可靠，重复性和稳定性均较好，可以用于测定木棉花中X的含量。

参考文献

[1]杨海光，方莲花，杜冠华，芒果苷的药理作用研究进展［J］.中国药理学通报，2016,32（1）：5-8.

[2]KIM S J SUNG M S HWAN H ,et al.Mangiferin protects retinal ganglion cells in ischemic mouse retina via SIRT1［J］.Curent Eye Research ,2016,41(6):844-855.

[3]NUINEZ SELLES A,DAGLIA M,RASTRELLI L. The potential role of m angiferin in cancer treatment through its immunomodulatory ,anti –angiogenic ,apoptp oic ,and generegulatory effects［J］.Biofactors,2016,42(5):475-491.

戴好富，梅文莉.海南药用植物现代研究［J］.中国科学技术出版社，2007：