基于宏基因组二代测序的支气管扩张症急性加重期病原学研究

支气管扩张症（简称支扩症）属于临床上常见的一种异质性慢性气道炎症性疾病，临床表现为慢性咳嗽、咳痰、咯血、气促、呼吸衰竭等症状，患者常因反复感染出现急性加重，给其生活质量和预后造成负面影响[1-3]。因此，明确支扩症急性加重期的病原学诊断对于精准治疗和改善患者不良预后至关重要。目前，针对下呼吸道病原学诊断方法包括传统微生物培养技术、抗原/抗体免疫学方法、病原体特异核酸序列PCR等，但以上方法存在培养阳性率低，培养周期较长等缺点，且容易对结核分枝杆菌、真菌等特殊病原菌造成漏诊[4-5]。宏基因组二代测序（mNGS）是近年来新兴的病原学检测方法，它不依赖于培养结果，可以直接从样本中获得病原体的核酸序列信息，具有更高通量、测序迅速及广覆盖，能够将所有潜在病原体无偏倚检测出来，尤其对一些少见的、新型的特殊病原体的检测，对下呼吸道感染的明确诊断及精准治疗有重要的临床应用价值[6]。本研究通过对支扩症急性加重期患者的支气管肺泡灌洗液（BALF）进行mNGS，为优化支扩症急性加重期的临床诊疗方案提供理论依据。

1 实验与方法

1.1 一般资料

收集2022 年1 月至2023 年12 月在住院的292 例支扩症急性加重期患者，根据检测方法不同将其分成常规组[女性 78 例，男性 68 例；年龄 18~75 岁，平均年龄（41.08±3.56）岁]和mNGS组[女性 ，男性 71{G} ；年龄 18~73 岁，平均年龄（41.28±3.42）岁]。两组一般资料具有可比性（ P>0.05) ）。

纳入标准：（1）支气管扩张症的诊断符合《中国成人支气管扩张症诊断与治疗专家共识（2021）》[7]中相关诊断标准；（2）年龄 >18 周岁；（3）咳嗽、痰量变化、脓性痰、呼吸困难或者运动耐受度、乏力或不适、咯血，这6 项症状中的 3 项及以上出现恶化，且时间超过 48 h。排除标准：（1）存在行气管镜检查禁忌症；（2）合并大咯血；（3）合并严重心血管疾病，如严重心力衰竭、不稳定型心绞痛、恶性心律失常；（4）合并恶性肿瘤；（5）严重肺气肿或纤维化所致的牵拉性支气管扩张；（5）预期随访困难或期间因病情加重退出本次研究者。

1.2 方法

通过支气管镜进行诊断和肺泡灌洗，采集BALF，部分送至天津医学科技有限公司进行mNGS检查，部分送至检验科微生物实验室进行常规细菌、真菌培养，PCR法检测常见呼吸道病毒。此外，对疑似肺结核、真菌感染患者进行结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT）、半乳甘露聚糖抗原（GM试验）和（1，3）-β-D葡聚糖（G试验），但这些方法作为辅助判断，不能作为病原学诊断依据。以检出阳性病原体为依据进行抗生素治疗。

1.3 观察指标

(1)记录两组病原体种类和分布情况。基于华大BGISEQ 平台上的 mNGS 结果解读文件进行衍生和修订，使用“具有临床意义的微生物”（CSM）的阳性标准：①细菌（不包括分枝杆菌）、真菌（不包括霉菌）、病毒和寄生虫：当微生物在物种水平上的相对丰度超过 30% ； ② 分枝杆菌：由于分枝杆菌污染的可能性低且核酸得率低，当在种水平上的严格比对序列数（SMRN） >3 时，则为 CSM；③霉菌：当在种水平上的 SMRN≥10 时，被认为是 CSM； ④ 不论检出的微生物其相对丰度如何，都不凭经验视为 CSM，除非另有证据支持或经主治医师认为有临床价值。（2）记录两组病情转归情况。选择常规组、mNGS 组患者各 20 例，收集其住院时间，采集空腹静脉血 2 mL，采用全自动免疫分析仪检测白细胞计数（WBC）、降钙素原（PCT）、C 反应蛋白（CRP）含量。

1.4 统计学分析

使用SPSS 26.0 软件处理数据，定量变量通过（ 表示，行t检验；计数资料使用[n (%) ）]表示，行