浅析白酒中甜蜜素的检测方法

摘要：本文通过在液质联用仪上进行实验研究，比较了外标法与内标法在白酒中甜蜜素检测方面的优缺点，如前处理过程的成本、效率，数据分析的稳定性、准确性，实验过程中的注意事项等。通过实验对比，内标法优势明显，不仅适用于白酒中甜蜜素检测，同样适合实验室其他食品样品的批量分析测试。

关键词：甜蜜素；液相色谱-质谱联用仪；方法比较

甜蜜素（又名环己基氨基磺酸钠），是一种人工合成甜味剂，与蔗糖比，成本低，甜度高，广泛应用于食品生产加工过程，提升口感。作为食品添加剂，GB 2760对其使用范围以及用量都有严格限定。白酒是我国传统的蒸馏酒，经粮食酿造而成，国家标准规定白酒中甜蜜素不得使用，一些商家为改善白酒口味，提高销量，非法添加甜蜜素，不仅违法而且对人身健康造成潜在威胁；因不得在白酒中使用甜蜜素，所以对检测方法的灵敏度要求较高，目前检测甜蜜素的方法主要有气相色谱法、液相色谱法和液质联用仪法，旧版GB 5009.97-2016规定白酒采用第三法液质联用仪检测，新版GB 5009.97-2023中第二法液相色谱法和第三法液质联用仪法均满足检测要求，本文以第三法作为研究手段进行分析论证。

1 仪器和设备

液相色谱质谱联用仪（AB 3500）、分析天平（FA1004B）、涡旋混合器、超生振荡器、高速离心机；

2 材料：离心管：50mL具螺纹盖刻度离心管、有机相微孔滤膜：0.22μm孔径；

3 标准物质和试剂

甜蜜素标准溶液（有证，1000ppm），甜蜜素-D4同位素内标溶液（有证，100ppm）；乙腈、甲酸：色谱纯

4 标准溶液配制

含0.1%甲酸的乙腈水溶液：吸取1.0mL甲酸，加入300mL乙腈，用超纯水稀释至1000mL，混匀；

内标法：吸取 1ml浓度1000μg/mL的甜蜜素标准溶液用超纯水定容至100mL，配成浓度为10μg/mL的标准工作液；吸取1mL甜蜜素-D4标液于20mL容量瓶中，用水定容，配成浓度为5μg/mL的同位素内标中间液；分别吸取10、20、50、100、400μL的甜蜜素标准工作液于10mL容量瓶中，加入同位素内标中间液100μL，用0.1%甲酸的乙腈水溶液定容，配成浓度0.01、0.02、0.05、0.1、0.4μg/mL的系列标准溶液，内标浓度为0.05μg/mL，临用现配。外标法：分别吸取10、50、100、500、1000μL的甜蜜素标准工作液于10mL容量瓶中，用超纯水定容，配成浓度为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0μg/mL的系列标准溶液；

5 试样提取

外标法：称取酒样10.0g，置于50mL烧杯中，于60℃水浴中加热30min，残渣全部转移至100mL容量瓶中，用水定容并摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤后备用；

内标法：称取2g试样（精确至0.001g）于离心管中，准确加入200μL环己基氨基磺酸同位素内标中间液，用含0.1%甲酸的乙腈水溶液稀释至20mL刻度，混匀，涡旋5min，超声提取10min，9000r/min离心5min，取样液过有机相微孔滤膜，供上机测定。

6 仪器条件

色谱柱：Kinetex C18柱，2.6μm，3.0mm×100mm；

流动相：乙腈、0.1%甲酸水溶液，流速0.3mL/min；

离子源：电喷雾离子源（ESI-）；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多重反应监测模式（MRM）；

离子化电压：-4500V，温度：450℃，喷雾气：40psi，气帘气：35psi，辅助加热气：45psi；

编辑进样序列，通过自动进样程序将标准系列工作液及样品溶液注入液质联用仪中，以被测组分浓度与内标浓度比值为横坐标，以被测组分色谱峰面积与内标物色谱峰面积比值为纵坐标，绘制标准曲线；环己基氨基磺酸多反应监测（MRM）色谱图如下：

7 结果

线性范围、定量限：在实验条件下，外标法与内标法的相关系数及线性范围见下表2

结果表明：与外标法相比，内标法获得的数据定量分析更精准，能够一定程度上避免因环境条件如温度波动造成的数据不稳定，校正曲线线性关系更好；低浓度状态下内标法响应更明显，灵敏度更高。

配制50%乙醇溶液，以此为基质进行加标实验，计算本方法的回收率和精密度，结果见表3

8 实验关注点

仪器方面：主机液质联用仪要定期清洗离子源，防止因污染导致灵敏度下降，定期清洗喷针，防止污染物堵塞导致不进样，机器下部空气滤网也要经常检查，必要时对仪器手动调谐检查，保证质量轴稳定，对相关调谐参数做好备份，应对突发情况；流动相配制过程经脱气、过0.22μm孔径滤膜；空气发生器和储气罐定期手动排积水；机械泵润滑油颜色发深时要及时更换新油；

环境方面：仪器房间保持恒定温度，如通过空调控制，并且在整个进样过程不调整；

操作方面：流动相配制满足一次完整进样，系统平衡时间建议一个小时左右，序列最后加一针清洗程序。

9 结论

本研究采用两种定量方法对白酒中的甜蜜素进行了检测，并对两种方法进行了对比分析。结果表明内标法在白酒分析中优势明显，有更好的数据稳定性、前处理过程时间缩短、整体检验效率更高、物料消耗低；该法不仅在白酒等含乙醇样品分析中经济高效，在固体、半固体样品分析中，与气相色谱法相比，无需经过衍生化，亦不用经过冰浴；液质联用仪分析时间短，9分钟即可完成一次进样，而气相色谱仪则需要15分钟左右，大大提高了批量检测的效率，液质联用仪作为实验室常开设备，结合实际情况统一检测方法也能够提高液质联用仪使用率，节约实验室运行成本；液质联用仪定量限更低，仪器灵敏度更高，适合微量样品检测，能够及时发现问题样品，为食品安全保驾护航。

参考文献

[1]国家市场监督管理总局，国家卫生健康委员会.GB 5009.97-2023 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸盐的测定[S].北京：中国标准出版社，2023.

[2] 国家卫生和计划生育委员会.GB 5009.97-2016 食品安全国家标准 食品中环己基氨基磺酸钠的测定[S].北京：中国标准出版社，2016.