基于 UPLC-MS/MS 法检测桑白皮中掺伪构树皮

1 仪器与试药

1.1 仪器：Agilent1290/6470B 高效液相色谱质谱联用仪（美国安捷伦有限公：司）;色谱柱：Agilent Poroshell 120 SB C18（2.1mm×100mm，2.7 μm）;MS205DU/A型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，感量：0.01 mg）;SK8200H 超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;HH-6恒温水浴锅（常州诺基仪器有限公司）;

1.2 药品与试剂：构树皮、桑白皮样品来源于安徽亳州药材市场＼零售药店＼网购等多平台及野生采集.桑田采集等。构树碱A对照品（曼斯特（成都）生物科技有限公司，批号：MUST-25042615，纯度99.16%），桑白皮对照药材（批号：121124-202109，中检院）;甲酸铵（罗恩试剂）;乙腈（德国默克 批号KS4443530230）， 水为蒸馏水（怡宝 批号20231026）;甲酸（阿拉丁 批号F112034-100ml）; 其他试剂均为分析纯..

2方法测试

2.1色谱、质谱条件-系统适用性

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）;以乙腈为流动相 A，以 0.1%甲酸 10mmol/L甲酸铵溶液为流动相B，梯度洗脱程序见表1;柱温 35℃;流速0.25ml/min;进样量为2μl

洗脱梯度

系统适用性：取构树碱A对照品溶液2ul测定，信噪比大于10：1

2.2对照品溶液的制备

取构树碱A对照品适量，精密称定，用70%乙醇制成每 1ml 含17ng的溶液.

2.3供试品溶液的制备（所有样品均粉碎后过4号筛）

2.3.1提取方法选择

加热回流.超声.浸泡后超声提取 比较

取构树皮取约3g，制成3组，每组3份，加70%乙醇100ml，称定重量.第一组加热回流45Min;第二组超声45min;第三组浸泡过夜后超声45min;再称定重量，用70%乙醇补足减失重量，摇匀，稀释，滤过.实验 结果如下：

2.3.2试剂考察

考察水、70%甲醇、甲醇、30%乙醇、70%乙醇、乙醇6种试剂.

取构树皮2批粉末，分别制成6组加水、70%甲醇、甲醇、30%乙醇、70%乙醇、乙醇50ml，称定重量.超声45min;分别补足减失重量，摇匀，稀释，滤过.实验 结果如下：（单位mg/g）

2.3.3时间、溶剂量考察

取构树皮粉末约3g，制成3组，每组3份，分别加70%乙醇25ml.50ml.100ml，称定重量.第一组超声30Min;第二组超声45min;第三组超声60min; 分别补足减失重量，摇匀，稀释，滤过.测定.实验结果如下：

样品溶液制备方法确定为：

样品均粉碎后过4号筛，取约3g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理45分钟（功率560W，频率45kHz），放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，精密吸取2ml置100ml量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度摇匀，滤过，即得.

3.方法学验证

3.1 专属性 基质效应实验

桑白皮溶液制备：取桑白皮对照药材（批号：121124-202109，中检院）按样品溶液制备法制备 色谱图如下：

桑白皮基质对照溶液制备：取构树碱A对照品（曼斯特（成都）生物科技有限公司，批号：MUST-25042615）适量，精密称定，加入适量桑白皮溶液制成每 1ml 约含17ng的溶液测试色谱如下：

构树皮溶液制备：取安徽亳州采购构树皮样1按样品溶液制备法制备 测试色谱如下：

构树碱A对照品溶液制备：取构树碱A对照品（曼斯特（成都）生物科技有限公司，批号：MUST-25042615）对照品适量，精密称定，加入适量70%乙醇制成每 1ml 约含17ng的溶液，检测结果如下

桑白皮溶液无响应，构树皮溶液响应明显，桑白皮溶液加入构树碱A后响应明显，专属性测试通过; 70%乙醇对照溶液响应与70%桑白皮基质对照溶液响应接近，基质干扰可忽略，满足检测需求。

3.2 线性关系实验

精密称取构树碱A对照品适量，逐步稀释成下表浓度，测定峰面积，绘制标准曲线，计算回归方程.结果如下表：

3.3重复性试验

取桑白皮粉末批按照3%掺入构树皮.按供试品溶液制备，测试计算重复性.结果显示，方法重复性良好

3.5精密度试验

取“重复性试验”下第一份供试品溶液，重复进样6次，计响应RSD，结果表明该法精密度好

3.6 稳定性的考察

取桑白皮粉末批按照3%掺入构树皮.按供试品溶液制备，分别于Oh.4h.8h.16h.24h 测试.结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好，满足检测需求.结果如下

3.7准确度试验

加样回收对照品溶液：精密吸取构树碱A对照品储备液稀释，制成对照品溶液1（210.615ng/ml）; 对照品溶液2（21.0615/m1）

取桑白皮掺入构树皮3% （经测定构树碱A含量2.1757ug/g），加入对照品溶液1（210.615ng/ml）适量，扣除溶剂后按样品溶液制备法制制备，测试计算回收率满足检测需求

3.8标准拟定

3.8.1取不同来源构树皮测定含量如下

3.8.2 方法检测限测试

取桑白皮粉按0.2%混合7种构树皮，按方法检测.信噪比均大于10. 满足检测需求

3.8.3 模拟不同掺伪比例测试

取桑白皮粉按照0.5-4.0%加入安徽亳州样1构树皮粉（含量最接近平均值） 按方法测试. 满足检测需求

综合考虑药材种植、加工实际情况，存在非主观掺伪造假；兼顾有效控制主观/大量掺伪情况；结合《中国药典》2025版四部0212中药材和饮片检定通则规定“药削及杂质通常不得过3%”. 将桑白皮的掺伪比例控制在3%以内即含量不超过1.6ug/g（市售样品大部分满足）

讨论：

本实验桑白皮样品主要来自本地主流零售商， 57%检出，可以确定存在少量掺杂，仅一批超过拟定限度；其余6批均在拟定范围内。

方法可以明确如未检出构树碱A则可以确定未掺入构树皮，如检出，则需要根据实际情况进行分析。因中药材的种植、采收、不均一等特殊性从源头开始才是保障药品质量与用药安全的关键，而非仅依靠检验。

本实验旨在为产品质量控制提供参考， 中药材含量普遍分布不均，不同产地.不同生长周期的样品含量可能相差几倍甚至几十上百倍，而受多种因素限制，本次实验未能全面构树皮不同产地.不同生长周期的样品情况，故拟定标准可能存在不适用性。

参考文献：

[1] 秦超燕，宁带连.构树化学成分及药理作用研究进展[.世界最新医学信息文摘，2019.19（96）：66-67

[2]不同产地桑白皮中7种成分的含量测定及化学...魏敏;陀扬凌;杜晓月...中药材，2020（01）

[3]李振国，贾敏如.桑白皮伪品构树皮的生药鉴定.中药材，1997，（02）：66-68.