老年AECOPD患者下呼吸道菌群分布与抗生素耐药性分析

引言：

COPD 急性加重期的发生与感染、环境和机体免疫等因素密切相关，老年患者免疫力低下，往往伴有病情进展，有更高的致病率和病死率[1]。由于抗菌治疗是重要的一环，导致临床治疗容易受到耐药菌的干扰而效果不理想。常规培养条件并不完善，对于检测未知比例的一些微生物有一定困难，检测结果反映的仅仅是一部分下呼吸道的病原菌，不能够真实地全面地说明菌群的情况。宏基因组测序技术在鉴定菌群构成及耐药结构方面，能获得高通量的非偏倚菌群分析，为其针对性用药提供了可能性。此次研究通过该检测方法从整体上分析老年AECOPD 患者肺泡灌洗液中菌群的情况，并进行抗药性检测，从而全面解释菌群的变化和耐药情况。

1、资料与方法

1.1 一般资料

本实验纳入老年 AECOPD 的患者 30 例，入选标准规定患者须大于或等于 65 岁，根据最新的 GOLD 指南中的 AECOPD 诊断标准，并且患者都是首次进行支气管肺泡灌洗术，并且患者在30d 之前没有进行系统使用抗生素，这样就对临床的菌群检测受到了药物影响而进行剔除。对于患者的选择进行了较为严格的要求，对患者剔除的规定如下，剔除患者中有活动肺结核、支气管扩张、以及患有肺癌的患者，这样就排除了其他因素对于患者造成临床试验结果的影响，因此对于使用了呼吸机进行治疗的患者，均未被研究选择。研究分析的年龄，患者平均年龄为72 岁，并且患者的年龄平均值为 68～79 岁，男性占总数的 63.3% ，为该实验的整体分析过程中造成了影响。研究中患者的 FEV1%预计值的平均数为 42.5，标准差 8.7，这样就说明了患者的肺功能受到了严重损伤。在 Charlson 合并症指数的中位数平均为3，这是患者的合并疾病指数，因此这样就导致了受试者在临床治疗中，受到的疾病影响，因此就造成了患者的临床条件过于复杂的情况。

1.2 方法

本研究试验者与实验室实施双盲模式，即对临床医师、实验人员均不知悉受试者的具体分组情况，尽量减少观察者的偏倚和测量者的偏倚。BALF 采样：针对同一肺亚段采样，取第二亚段，BALF 采集量不超过 20ml ；BALF 采集后分为两份，其中一份直接用于细菌培养接种在血平板、巧克力平板、麦康凯平板上进行 48℃培养；另一份通过 0.22μm 滤膜过滤除去宿主细胞，提取BALF 微生物基因组DNA。同时进行序列测定，利用高通量测序平台 IlluminaNovaSeq6000 进行测序，以明确菌群结构和丰富度。与传统培养技术相比，该方法可对菌群丰富度更加全面地反映，更弥补了难以培养菌的检测缺点。

抗生素敏感性测试采用 CLSI(2023)标准、AUTOMATE 仪器系统和纸片法共同完成对菌株的检测及菌株鉴定，并检测产 ESBLs 菌株的 blaCTX-M、blaTEM、blaSHV等重要抗生素耐药基因进行基因水平耐药机制的进一步确认。以测序结果和耐药性为基础，构成菌群-耐药性的矩阵，以此探索菌群的变化趋势与耐药性的关系。Shannon多样性指数表示菌群物种的丰富性和稳定性。Bray-Curtis 的差异度计算描述菌群两两个体间差别程度，上述技术的结合为阐释菌群演变规律和耐药性产生关系提供了可靠数据。

1.3 观察指标

研究以老年 AECOPD 人群肺部的主要呼吸道菌群组成和耐药模式为主要观察指标，重点关注主要病原菌种类、比例以及 MDR 构成比，体现优势菌群的耐药谱型和耐药基因表达，反映耐药趋势的微观基础。菌群 ∝ 多样性反映群体微生态整体结构稳定性。结合宿主 CRP 和 PCT 反映不同菌种的菌株构成，探讨宿主炎症反应与菌群的关联性。纳入以往抗生素使用历史，观察可能产生的耐药表型影响，进而探讨抗茵药物敏感性变化。对于多次分离到的同名菌株采用脉冲场凝胶电泳来实现该株菌之间的克隆播散监测，从分子流行病学的角度进行分析，寻找患者个体精准的干预方法。

1.4 统计学分析

数据采用 SPSS26.0 统计学软件进行数据统计分析，正态性检验后计数资料采取非参数统计学方法，分类资料比较采用 χ² 检验或 Fisher 精确检验。以 P<0.05 为差异有统计学意义[2]。

2、结果

研究存续期内，所有参与研究病例的下呼吸道菌群分布与耐药特征，详情见下表：

表1 下呼吸道菌群分布与耐药特征

3、讨论

我们的研究结果显示老年 AECOPD 患者的下呼吸道菌群优势菌均为革兰阴性杆菌以及其耐药率高，说明治疗上使用抗生素很具有挑战性。降低的菌群多样性以及富集耐药基因与此密切相关，即抗生素使用后破坏了患者原有微生态平衡。宏基因组测序和耐药基因检测的结果为菌群和耐药的更详细情况提供了更多的参考信息[3]。此外，我们研究构建耐药的预测模型，以此强调菌群动态性对于指导个体用药的重要性。基于我们以上研究结果，笔者建议今后针对患者菌群的改变临床需要实施精准的干预，避免药物滥用现象；抗菌药物的滥用会给临床带来的风险，需要临床高度重视。而抗生素的滥用和肠道菌群之间的相互作用将会促进患者预后和肠道菌群治疗等方面的研究。

参考文献：

[1]于爽,张玉娇,王娜娜等.老年AECOPD患者下呼吸道感染的病原学特征及与炎症免疫平衡的关系研究[J].现代生物医学进展,2024,24(14):2650-2655+2671.

[2]张黎,刘远程,赵兰兰.AECOPD 下呼吸道标本念珠菌阳性的危险因素分析[J].医学信息,2021,34(19):92-95.

[3]习静,脱鸣富,魏育芳等.不同病程 COPD 并发下呼吸道感染病原菌分离及耐药情况分析[J].中国抗生素杂志,2020,45(08):798-803.

作者简介：姓名:王江丽（ 1991 年 10 月~） 籍贯 :永胜民族:汉族，职称:主治医师学历:本科主要从事：呼吸与危重症医学科临床工作。