均相酶免疫法测定血清丙戊酸浓度新方法研究

癫痫作为一种常见的神经系统慢性疾病，我国约有 900 万患者，其中活动性癫痫患者 500-600 万，每年新增约 40 万例 [1]。丙戊酸是广谱抗癫痫药物，是多种癫痫类型的首选，但因其治疗指数低、药代动力学个体差异大，血药浓度监测对临床治疗至关重要 [2]。目前临床常用的高效液相色谱法、液质串联质谱法和化学发光酶免疫分析法存在仪器昂贵、成本高、操作复杂等问题，不适合基层医院开展。本研究旨在建立一种能在生化分析仪上使用的均相酶免疫法，为丙戊酸血药浓度监测提供更便捷、经济的方法。

1 对象和方法

1.1 对象

收集2024 年1 月至2024 年12 月我院服用丙戊酸药物的癫痫患者342例，其中男性195 例，女性147 例，年龄11-85 岁，平均（ 46.24±15.63 ）岁。所有患者均符合癫痫的诊断标准，且在采血前已规律服用丙戊酸至少7 天。排除溶血、乳糜血及黄疸等影响检测的样本。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

仪器：雅培 i1000SR 全自动免疫分析仪（美国雅培公司）、迈瑞BS2000 全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）、岛津LC - MS8040 液质串联质谱仪（日本岛津公司）。

试剂：雅培丙戊酸检测试剂、校准品、质控物（美国雅培公司）；迈瑞丙戊酸检测试剂、校准品、质控物（北京九强生物科技有限公司）；迪赛思丙戊酸检测试剂、校准品、质控物（浙江迪赛思诊断技术有限公司）。

1.2.2 检测方法

样本采集：采集患者清晨空腹静脉血 3-5ml ，置于无促凝剂的试管中，3000rpm 离心 10 分钟，分离血清，立即检测或 -20% 冻存备用。冻存样本在检测当日溶解，所有样本检测在一天内完成。

检测步骤：按照各仪器及试剂说明书的要求进行操作。迈瑞生化仪采用均相酶免疫法，雅培化学发光仪采用化学发光酶免疫分析法，对同一批样本进行平行检测。

1.3 观察指标

线性范围：采用倍比稀释法，将高值样本稀释为1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64 等浓度，测定理论浓度与实测值的线性关系，要求 R²⩾0.95 ，斜率在 0.97-1.03 之间，偏差 <10% 。

精密度：以美国《临床实验室标准化协会 EP5 - A》进行精密度评价。采用 2 个水平的室内质控品，每天检测 4 次，连续 5 天，计算批内和批间变异系数（CV），要求重复性精密度 <1/4 总误差，中间（室内）精密度 < 1/3 总误差。

抗干扰能力：选取溶血、乳糜血、黄疸样本各 20 例，测定干扰物质对检测结果的影响。

1.4 统计学分析

选用 SPSS20.0 进行数据的统计和处理。计量资料用（ ）描述，采用 t 检验；计数资料采用 [n(%)] 表示，采用卡方（ x² ）检验；多组间比较采用方差分析，采用 Pearson 进行相关性分析。当 P<0.05 时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 线性范围与相关性分析

均相酶免疫法的线性范围为 2.3-127.1μg/ml ，线性相关系数R²=0.981 ，斜率为 0.992，各浓度点实测值与理论值偏差均 <8% 。选择 100 例临床样本与化学发光法对比，检测结果显示，两者相关性系数_r=0.926 （ P<0.05 ），回归方程为 y=1.13x+5.24 ，表明两种方法具有良好的一致性。

2.2 对比不同检测平台的精密度

2.3 抗干扰能力

溶血（ Hb>5g/L ）、乳糜血（ TG>7.0mmol/L ）、黄疸（ TBil>20mg/dl ）样本对均相酶免疫法的检测结果影响较小，偏差均 <5% ，符合临床要求。

3 讨论

目前普遍认为，癫痫的发生与神经元的异常放电密切相关。多种因素可诱发神经元异常放电，如遗传因素导致的离子通道功能异常、脑部疾病（脑血管病、脑肿瘤、脑外伤等）引发的脑组织损伤和神经递质失衡、代谢紊乱造成的神经元兴奋性改变等 [3]。这些因素相互作用，使得大脑神经元网络的功能失调，进而产生癫痫发作。

本研究旨在建立一种基于均相酶免疫法测定血清丙戊酸浓度的新方法。通过收集大量癫痫患者血清样本，采用国产迈瑞生化分析仪及配套试剂，并与雅培化学发光法、岛津液质串联质谱法进行对比分析。结果显示，均相酶免疫法具有良好的线性范围，批内和批间精密度均符合要求，与化学发光法相关性良好，且抗干扰能力强。这表明均相酶免疫法在实际应用中具有显著优势，其操作简便、成本较低，仪器和试剂均可国产化，适合在基层医院开展，能为更多患者提供便捷的血药浓度监测服务，有助于提高癫痫治疗的精准性[4]。

综上所述，本研究建立的均相酶免疫法测定血清丙戊酸浓度的新方法，为临床提供了一种经济、便捷且有效的丙戊酸血药浓度监测手段。

参考文献：

[1] 陈傲寒 , 黎银潮 , 朱少芳 , 等 . 癫痫患者 OCM 相关酶 SNPs 位点基因型和抗癫痫发作药物对 OCM 代谢物水平的影响 [J]. 中华神经医学杂志 ,2022,21(7):657-663.

[2] 米佳丽 , 李晶 , 张兴 . 癫痫患者丙戊酸钠血药浓度的临床特点分析[J]. 中国现代应用药学 ,2020,37(20):2506-2510.

[3] 宋志刚 , 苏李 , 郭海志 . 癫痫持续状态后患者血清 FGL2、AQP4、Aβ 表达与认知预后相关性研究 [J]. 脑与神经疾病杂志 ,2025,33(5):292-296.

[4] 陈艳飞 , 刘琴 , 王玲萍 , 等 . 均相酶免疫法检测血清维生素 D 含量的性能验证 [J]. 中国血液流变学杂志 ,2024,34(1):113-117.