液相色谱法检测食品中脱氢乙酸的注意事项

Abstract： This article discusses safety protection and operating standards， testing and methods， key issues and optimization of sample pretreatment， quality control and data reliability. Analysis of sample pretreatment， quality control， and data reliability in accordance with the National Food Safety Standard for the Determination of Dehydroacetic Acid in Foods （GB 5009.121-2016）： Precautions to be taken during the operation of detecting dehydroacetic acid in food.

Keywords： Dehydroacetic acid; GB 5009.121—2016;Operating standards; Quality Control; Data reliability

1 引言

《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定》（GB 5009.121—2016 ）[1] 是中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布的强制标准，基本涵盖所有可能含有脱氢乙酸食品类别，是食品检测中常用的检测标准。近年来，随着人们生活水平的提高，食品安全也被更多的人关注和重视 [2，3，4]，其中食品中脱氢乙酸也被列入每年的国家食品抽检项目中。GB 5009.121-2016 标准采用高效液相色谱法（HPLC），兼具高灵敏度和强特异性，可精准检测复杂食品基质中的脱氢乙酸，同时支持多种防腐剂同步分离分析，显著提升检测效率；其方法步骤标准化程度高，前处理流程相对简化，便于推广应用。但是实际检测中容易受共存防腐剂（如苯甲酸、山梨酸）的色谱峰干扰，需依赖优化洗脱条件实现完全分离；此外，高脂肪或深色样品的前处理净化也容易导致回收率偏差或色谱柱污染，增加检测成本和操作复杂度。基于以上原因对需要注意问题做以下总结。

2 安全防护与操作规范

脱氢乙酸是一种不饱和脂肪酸类化合物 ^[4-7] ，作为食品添加剂对人体和环境均有一定的危害性 [8-11]。长期摄入过量的脱氢乙酸可能会对中枢神经系统产生抑制作用、损害消化系统、干扰内分泌系统，如果进入环境中，可能会对水生生物产生毒性作用，影响水体生态平衡。脱氢乙酸的测定常用到甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂。实验操作需在通风橱内进行，确保有害气体及时排出，操作人员必须佩戴防化手套、护目镜及防毒面具，避免皮肤接触和吸入。涉及的氢氧化钠、盐酸等酸碱试剂具有强腐蚀性需使用合适器皿、轻拿轻放，一旦发生试剂泄露或意外接触，应立即用大量流动清水冲洗，并根据具体情况进行后续医疗处理。

生物安全防护也是脱氢乙酸检测实验中的重要组成部分。若检测过程涉及微生物检测，需穿戴专用防护服、口罩、手套和护目镜，使用后的培养基、废弃物等需经过高压蒸汽灭菌处理，确保完全灭活方可丢弃，实验结束后的全面消毒防止污染实验环境和操作人员。

甲醇、乙腈等有机溶剂需要在通风橱内操作，实验人员需穿戴专用防护服、口罩、和护目镜及耐溶剂手套；废液需要分类收集（如含有机溶剂废液采用活性炭吸附预处理），避免环境污染。

3 试验与方法

3.1 仪器操作 ： 液相色谱系统开机前需检查流动相管路无气泡，柱温箱设定为 28℃（±1C ）以避免保留时间漂移；检测器流通池每周用 10% 异丙醇超声清洗，防止基线噪声升高。

3.2 材料与试剂

3.2.1 试剂选择 ：

3.2.3 样品前处理材料：滤膜选择（ 0.22μm 尼龙膜）需验证无目标物吸附，高脂样品[12-13]建议冷冻离心（ 4^qC ， 8000rpm ，10min）去除脂质干扰。

3.2.2 标准溶液配制： 脱氢乙酸标准品（纯度 ⩾99.5% ）需避光保存于棕色瓶，定期验证标准曲线线性（ R2⩾0.999 ）母液浓度建议 1mg/mL ， 工作液稀释后需当日使用，避免光解及溶剂挥发导致的浓度偏差。

5.3.3.1 样品保存：待测样品需避光冷藏（4℃），尽快检测，避免降解。

4 样品前处理关键问题与优化

5.3.2 低灵敏度或检出限偏高：检查检测器氘灯寿命（通常 ⩽2000h ），或提高进样量（ ⩽20μL 避免柱超载）；方法检出限（MDL）需通过空白样品加标（3 倍信噪比）验证，建议 MDL 。

5.3.1 色谱峰拖尾或分叉：可能因色谱柱污染或流动相 pH 不匹配，建议用 0.1% 甲醇 -甲醇冲洗柱体，或调整缓冲液pH 至6.5＼～7.0。

4.1 复杂基质干扰：深色食品（如酱油、酱料）需增加净化步骤[14-18]，如采用QuEChERS法（PSA/C18 吸附剂）去除色素及脂肪酸；高糖样品建议稀释后过膜，避免柱压升高。

4.2 回收率控制：超声提取时间需优化（建议 30min ），过长可能导致脱氢乙酸热降解；加标回收实验需覆盖样品基质类型（如液体、固体），回收率阈值设为 80%～120% （GB5009.121-2016 通用要求）

4.3 色谱柱维护：反相 C18 色谱柱每日用高比例甲醇 （⩾90% ）冲洗 30min ，避免酸性缓冲液残留腐蚀填料；柱效定期校验（理论塔板数 ⩾5000 ）。

5.3.3 其他注意事项 ：

4.4 流动性梯度优化：针对共存防腐剂（如苯甲酸、山梨酸），推荐梯度洗脱程序：初始10% 甲醇→ 5min 内升至 50%⟶10min 内至 70% ，流速 1.0mL/min ，确保脱氢乙酸保留时间在 8～10min 且与相邻峰分离度 ⩾1.5

5.3.3.2 方法验证：初次使用该方法时，需通过重复性、灵敏度和检出限验证，确保符合标准要求。

甲醇、乙腈需为色谱纯，磷酸盐缓冲液（ pH6.8±0.1 ）需现配现用，避免微生物污染；固相萃取住（如C18 或HLB）需验证回收率及吸附效率。

4.5 检测波长验证：脱氢乙酸在 230nm 处吸收最强，但需扫描 200～400nm 确认无基质干扰峰重叠，必要时采用二极管阵列检测器（DAD）辅助定性。 见图 1

5.3 空白实验：确保试剂盒器具无污染，空白样品中不得检出目标物。常见问题与解决方案

5.1 校准曲线与线性范围：标准曲线浓度建议 ，强制过零点可能导致低浓度误差，推荐截距拟合；每批次检测需插入质控样（已知浓度标准溶液），偏差应≤ 5% 。

5.2 平行性与重复性：同一样品至少 3 次平行测定， RSD⩽10% ；实验室间比对需采用标准物质（如GBW（E）100348）验证方法一致性。

5 质量控制与数据可靠性

GB 5009.121-2016 标准采用液相色谱法（LC/HPLC）检测食品中脱氢乙酸（DHA），具有高灵敏度和标准化操作优势，适用于复杂食品基质中防腐剂的定量分析。然而，实际应用中面临共存防腐剂干扰、高脂、深色样品前处理效率低、色谱柱稳定性不足等挑战。通过优化流动相梯度、引入QuEChERS 净化技术及强化质量控制体系，可显著提升方法可靠性 [19-24]，但需进一步解决基质效应与长期检测成本间的平衡问题。

6 结论与展望

参考文献

[1] 食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定：GB 5009.121—2016[S]。 北京：中国标准出版社，2016。

[2] 防腐剂在月饼中的应用及其安全性分析. 刘娇 ; 果振灿. 现代食品，2024（24）

[3] 福安市月饼中防腐剂检测结果分析. 林恒 . 食品安全导刊，2024（22）

[4] 食品中脱氢乙酸检测方法的研究. 高学琴 . 食品界，2018（08）

[5] 高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量的研究 . 王若燕 ， 王立媛 . 中国卫生检验杂志 ，2003（05）

[6] 浙江省市售米粉制品脱氢乙酸使用调查及暴露评估. 王绩凯; 张荷香; 齐小娟; 陈莉莉;贺悦 ; 陈江 . 中国食品卫生杂志 ，2024（09）

[7] 用高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸. 徐红 ; 郭晓霖. 中国质量技术监督，2010（05）

[8] 高效液相色谱法测定牛奶中3 种防腐剂[J]. 马晓年; 陈俊秀; 农蕊瑜; 李文廷; 蒋梦. 中国乳品工业 ，2022（03）

[9] 高效液相色谱法测定面包、糕点及饼干中脱氢乙酸及其钠盐的含量 . 夏林林 ; 双杨 ;陈银华 ; 吴磊磊 ; 朱婷 . 食品安全导刊 ，2023（35）

[10] 高效液相色谱法同时测定饮料中的苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸和糖精钠 [J]. 冯俊富 ;朱飞如 ; 余开科 ; 骆海春 . 现代食品 ，2021（18）

[11] 高效液相色谱法同时测定糕点中的苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸 . 吕琳 . 食品安全导刊 ，2015（27）

[12] 高效液相色谱法测定婴幼儿乳粉及儿童食品中的防腐剂 . 李小娟 . 食品安全导刊 ，2024（24）

[13] 高效液相色谱法测定牛奶和奶粉中的脱氢乙酸 . 孙艳芳 ; 张剑峰 ; 王缘 ; 殷明杰 ; 张薇 . 食品安全质量检测学报 ，2018（09）

[14] 气相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸含量. 高小云; 李林. 食品安全导刊 ，2024（25）

[15] 高效液相色谱法测定面包、饼干等烘焙类食品中的脱氢乙酸. 赵欣; 李强. 食品安全质量检测学报 ，2018（13）

[16]高效液相色谱法测定月饼中3种防腐剂. 金露;张妤;虞选柯;郭应建;陆雪娇;关允诗;黄光荣 . 食品工程 ，2012（01）

[17] 液相色谱法检测食品中的脱氢乙酸含量. 熊齐荣 . 食品界，2016（10

[18] 脱氢乙酸并未被“开除”. 马志英 . 大众医学 ，2025（02）

[19] 高效液相色谱法测定椰汁中脱氢乙酸含量的不确定度评定 . 王攀峰 . 食品安全导刊 ，2023（25）

[20] 发酵豆制品中脱氢乙酸检测方法的优化 . 胡贝 ; 李丽霞 ; 李晓健 ; 刘红 ; 黄伟 . 中国酿造 ，2019（08）

[21] 高效液相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量的方法优化. 吴宁宁; 高运通. 产业与科技论坛 ，2019（11）

[22] 液相色谱法测定糕点中脱氢乙酸不确定度评定. 胡自钊 ; 周航. 食品界 ，2016（10）

[23] 气相色谱法测定食品中脱氢乙酸含量的方法优化. 邵敏 . 中国食品，2025（04）

[24] 高效液相色谱法测定果皮丹中苯甲酸和山梨酸的不确定度评估 [J]. 梁洁怡 ; 张志舟 ;梁柳泳 ; 张飞 ; 舒永红 . 云南 化工 ，2022（11）