牛奶中糠氨酸测定的改进

巴氏产品在营养和口感上略胜一筹，保留了鲜奶的营养和浓厚的奶味，在规定的时间内，采用较低的杀菌温度，在杀灭牛奶中有害菌群的同时完好地保存了营养物质和纯正口感。灭菌乳产品达到了商业无菌状态，不含任何在产品贮存运输及销售期间能繁殖的微生物；复原乳主要是将，奶粉加水然后还原的乳制品，因加工过程存在高温处理、营养流失等问题。

通过糠氨酸的检测，能辨别出产品的杀菌温度是否正常，结合乳果糖的检测，来最终判定产品是否符合巴氏杀菌乳、灭菌乳、复原乳。糠氨酸项目的检测在乳制品工厂是必不可少的检测项目，尤其是通过优质乳认证的企业，巴氏奶检测糠氨酸项目的的频率较高。

一、试剂材料

除了另有其他说明，此方法所用试剂为分析纯，水则为一级水

（一）甲醇：色谱纯（二）浓盐酸：密度为1.19g/mL（三）三氟乙酸：色谱纯（四）糠氨酸标准品

（五）3mol/L 的盐酸溶液：在75mL 的水中加入25mL 的浓盐酸，混匀待用（六）10.6mol/L 的盐酸溶液：在24mL 的水中加入176mL 的浓盐酸，混匀待用

（七）0.22um 的水相滤膜

（八）糠氨酸标准曲线，0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L 的糠氨酸标准溶液。

（九）干燥箱：110℃（十）涡旋器

（十一）高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

二、采样

样品为鲜博士鲜牛奶,保质期为7 天，在保质期内完成检测。在鲜博士鲜牛奶加入糠氨酸标准溶液，配置成20mg/L 的奶标，待检测。

三、分析步骤

（一）水解液的制备：当日15 时左右使用移液器吸取2.00mL 的鲜博士鲜牛奶，放置于消解管内，使用移液管加入6.00mL 的 10.6mol/L 的盐酸溶液，使用涡旋器进行混匀，盖上盖子，将其置于 110℃的干燥箱内，加热水解12 小时-23 小时，约加热1 小时左右后，轻轻摇动消解管。待次日8 时左右加热后，将消解管从干燥箱中拿出，进行冷却，之后使用滤纸进行过滤，滤液待测。

（二）蛋白质含量测定：使用移液器吸取2.00mL 的水解液，按照GB5009.5 第一法，使用自动凯式定氮仪法进行蛋白含量的测定，单位为mg/L。

（三）糠氨酸含量测定：使用移液器吸取 1.00mL 的水解液，正常加入 5.00mL 浓度为6g/L 的乙酸铵溶液进行稀释；我们改进方法使用一级水代替6g/L 的乙酸铵溶液，涡旋器混合均匀后，经过 0.22um 的水相滤膜进行过滤，供上机。使用高效液相色谱仪进行上机检测。色谱参考条件：

色谱柱：SB-C18，250mm*4.6mm，5um 粒径

柱温：32℃

流动相：0.1%浓度的三氟乙酸、甲醇，梯度洗脱。

四、结果的计算

巴氏杀菌乳糠氨酸数值以 mg/l00g 蛋白质表示。用一级水代替乙酸铵，使用加标浓度为20mg/L 的奶标，验证回收率：

检测鲜博士鲜牛奶 485ml 糠氨酸数值为 6.5mg/100g 蛋白质、5.4mg/100g 蛋白质，符合要求（内控标准≤8.0mg/l00g 蛋白质），且与平日使用 6g/L 的乙酸铵溶液数值一致，无变化，平日使用乙酸铵溶液检测此产品数值(4.5-7.5mg/100g 蛋白）；同时进行了 双人6 平行测试，人员1 检测回收率范围为 94.5%98.3% ，回收率平均值为 95.6% ；人员2 检测回收率范围为93 2%96.7% ，回收率平均值为 95.2% ；双人验证奶标回收率均在范围内，符合 GB/T 27404 被测组分含量 1-100mg/kg ，回收率范围为 90-110% 。重复性最大值为 1.81% ，在目标值 5.3%PA ，符合分析性要求。

五、结论

在检测糠氨酸项目时，我们使用一级水替代6g/L 的乙酸铵溶液对水解液进行稀释，通过加标进行回收率验证，双人6 平行验证，对实验结果没有影响，符合回收率要求，不仅节省了配置药品的时间，而且还节约了乙酸铵药品的使用。

另外，乙酸铵为弱酸性药品，长期使用酸性溶液可能对色谱柱的填料造成腐蚀、影响分离效果，影响检测结果，缩短色谱柱的使用寿命；还可能加速高效液相色谱柱的磨损与老化，进而缩短色谱柱的使用寿命。

综上所述：使用一级水替代 6g/L 的乙酸铵溶液，不仅节约了药品，还增加了色谱柱的使用寿命。

作者简介：于杰子，1987 年，女，汉族，辽宁抚顺 ，沈阳农业大学，本科，研究方向：乳制品检测。

作者简介：叶琳琳，1981 年，女，满族，辽宁鞍山 ，渤海大学，本科，研究方向：乳制品质量管理。

作者简介：张洋，1991 年，女，汉族，辽宁凌海 ，沈阳农业大学，本科，研究方向：乳制品检测。

作者简介：腾东梅，1988 年，女，汉族，内蒙古赤峰敖汉旗 ，大连工业大学，本科，研究方向：乳制品检测。