结核 γ- 干扰素释放检测、核酸扩增检测联合结核感染 T 细胞监测对肿瘤合并结核感染患者的价值分析

前言

结核病是一种以肺结核为主要表现的慢性传染病，主要是由结核分枝杆菌所致。恶性肿瘤是中国最常见的疾病之一，也是威胁人类健康的重要因素之一。近年来，以肺结核合并肺癌为主的恶性肿瘤发病率呈上升趋势，已成为威胁人民身体健康的重大疾病[1]。结核和恶性肿瘤在病源、组织病理转移、临床发展、治疗和预后方面存在很大的差异，但在临床症状、放射学及实验室测试中，有相似处，因此诊断较为复杂。故对于临床肿瘤患者有无合并结核病，选择有效的诊断方法，对患者治疗方案选择、经济费用和预后都具有十分重要的作用。临床包含结核 干扰素释放试验 （TB-IGRA）、核酸扩增检测（GeneXpert）、结核感染 T 细胞体外释放酶联免疫试验 （T-SPOT.TB） 等等。其中 TB-IGRA 是一种新型的结核病检测手段，通过检测 T 细胞对特定结核抗原的反应，以评估是否存在结核感染 [2]。GeneXpert 通过检测结核分枝杆菌的DNA 或 RNA 来确认感染。TB-IGRA 法不需要对外周血中的淋巴细胞进行分离，可以直接在血液中进行 T细胞的免疫应答，灵敏度和特异性高[3]。T-SPOT.TB 是指在结核菌感染初期，激活血液中有关特定的抗原蛋白质，并用 ELISA 法对被激活的结核特异性 T 淋巴细胞进行检测和登记，进而考虑是不是由结核菌感染引起 [3]。鉴于此，本文选取有关符合纳入标准的患者，探究开展综合监测（即：TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB）的价值。详细报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取于 2021 年 1 月至 2023 年 12 月我院就诊的 100 例肿瘤疑似合并结核感染患者，男性例数 69 例，女性例数 31 例，年龄经汇总发现范畴于 40-80 岁，均值 56.87，标准差计算显示为 11.78，肿瘤分类含肺癌54 例、大肠癌11 例、肝癌15 例、胃癌14 例、其他6 例。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①均为肿瘤患者；②均接受TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB 监测；③患者签署知情同意书，自愿参与本研究；④信息记录完好。

排除标准：①不包括任何其他疾病（如自身免疫性疾病、急性感染等）的患者；②存在严重心血管、呼吸系统或其他器官功能障碍的患者；③在过去三个月内接受过抗结核药物治疗的患者； ④ HIV 感染、长期使用免疫抑制剂等情况的患者；⑤无法有效理解研究内容或无法合作的患者。

1.3 方法

纳入相关 100 例患者均接受 TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB、细菌性涂片检测，具体内容为：（1）

TB-IGRA ：用肝素抗凝试管收集 4 毫升空腹静脉血，根据说明书，采用结核分枝杆菌 干扰素释放试验（郑州安图生物技术公司）进行。接着，在生物安全柜内将阴性对照培养液（N）、阳性对照培养液（P）和测试培养液（T）依次加入至细胞培养板相应孔内，100μl/ 孔；将血液等量分配到阴性对照孔（N 孔）、阳性对照孔（P 孔）、测试孔（T 孔），每孔体积为 1 毫升。然后将这些试管在 37 摄氏度的环境下孵育 16至24 小时。孵育结束后，从每个细胞培养板孔中吸取上清进行IFN-γ 水平检测。

（2）GeneXpert ：漱口后，指导患者咳出深部痰液，采集 5 毫升痰液，使用无菌吸管吸取约 2 毫升痰液，将其与 4 毫升 4% 的氢氧化钠 （NaOH） 溶液混合并摇匀，在室温下放置 15 分钟。之后，使用无菌吸管吸取 2 毫升混合液，并将其加入到 GeneXpert 检测试剂盒中。将试剂盒放入 GeneXpert 检测仪器（赛沛GeneXpert IV-R1 型号）中进行检测。若检测到结核分枝杆菌DNA 则为阳性，未检测到则为阴性。

（3）T-SPOT.TB ：采用密度梯度离心法采 获得外周血单核细胞，参照 T-cell pot 试剂盒（北京万泰生物制药）的说明 进行了检测。对阳性结果的判定是基于对抗原 A 和对抗原 B 进行 的情况下，斑点数目（抗性 A、B）-阴性对照斑点数>6 ；阴性对 >2× 阴性对照的斑点数。（4）细菌性涂片检查：保留患者清 司改良的罗氏培养液实施痰培养操作，按照药品说明书的要求进行。 的菌落时则为阳性判断标准。

1.4 观察指标

统计 TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB、三者联合检测的检出结果、诊断效能。1.5 统计学方法

涵括信息予以 SPSS22.0 分析，计数资料比如相关检测的检出结果、诊断效能数据，则用 （%） 表示，以x2 检验，符合正态分布的计量资料，由（ ）表示，以t 检验， P<0.05 差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检出情况

细菌性涂片检查结果显示合并感染者 85 例，未合并感染者 15 例；TB-IGRA 阳性 83 例、阴性 17 例，包含误诊 5 例、漏诊 7 例；GeneXpert 显示阳性 81 例（误诊 8 例），阴性 19 例（漏诊显示 12 例）；T-SPOT.TB 阳性 82 例，阴性 18 例，包含误诊 7 例，漏诊 10 例；三者联合检测阳性 85 例、阴性 15 例，含漏诊、误诊各自1 例。见表1。

灵敏度、准确度诊断效能上，发现三者联合检测 > TB-IGRA、T-SPOT.TB、 ，具备差异（P ）；TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB 之间的灵敏度、准确度对比，未见差异（ P>0.05） 。特异度效能指标上，三者联合检测＞ TB-IGRA、T-SPOT.TB、GeneXpert，TB-IGRA 和 GeneXpert 对比，具备差异 （P<0.05 ）；T-SPOT.TB 分别和 TB-IGRA、 对比，未见统计意义（ P>0.05^′ 。阳性预测值上四组对比，显示数据均衡（ P>0.05 ）。阴性预测值效能指标上，发现三者联合检测 > TB-IGRA、T-SPOT.TB、GeneXpert，GeneXpert 分别和 TB-IGRA、T-SPOT.TB 对比，具备差异（ P<0.05 ）；GeneXpert、T-SPOT.TB 之间对比无差异（ P>0.05） 见表2。

3 讨论

目前，结核病的诊断主要采用临床细菌培养法，结核菌培养法是目前临床上最常见的结核病诊断方法，操作简便，检出少量的痰中杆菌，但该方法操作繁琐，耗时长，不适合于结核病的早期筛查[4-5]。当人体被结核菌感染后，血液中储存的特定 T 淋巴细胞会在再次与结核菌发生反应时立即生成并释放出 γ 干扰素。TB-IGRA，是一种效应性T 细胞，被结核杆菌特异性抗原所激活，通过检查结核病的传染来做出诊断的，可于结核分枝杆菌活跃性感染或者潜伏性感染进行辅助诊断；但对于急性结核感染的灵敏度较低，尤其是在免疫力下降的患者中 [6]。GeneXpert，是一种采用 PCR 方法对标本进行扩增，结果阴性并不能说明是结核病，还需要结合患者的临床表现和影像学检查来判断，但对样本质量要求高，假阳性率可能受到污染的影响。T-SPOT.TB 是一种细胞免疫检查，主要是通过观察 T 细胞的分泌物来判断是否患有结核病，对各类结核性疾病具有高度的敏感性和特异性；但是对结核的诊断有一定的局限性，对已接受治疗或免疫抑制的患者，结果可能不理想，需要与患者的临床表现、影像学检查和痰液化验等综合分析。为了提高这类患者中结核感染的诊断率，开展综合监测策略（TB-IGRA、GeneXpert 和T-SPOT.TB）具有重要意义。

结合本研究数据分析，金标准显示合并感染者85 例，未合并感染者15 例；三者联合检测：阳性85 例，阴性 15 例（含漏诊、误诊各自 1 例）；统计分析联合检测在灵敏度和准确度上优于单独检测的三种方法，具备差异；TB-IGRA、GeneXpert、T-SPOT.TB 之间的灵敏度、准确度无显著差异；联合检测在特异度效能上也优于单独检测，而 TB-IGRA 与 GeneXpert 对比有差异；T-SPOT.TB 与其他两者对比无统计意义。阴性预测值方面，联合检测表现优于单个检测方法，GeneXpert 与TB-IGRA、T-SPOT.TB 的对比中存在差异。系列数据均表明，TB-IGRA、GeneXpert 和 T-SPOT.TB 三种检测手段结合起来，可以有效地提高结核病的检出率。

综上所述，综合监测策略，为肿瘤合并结核感染患者提供一种有效的诊断手段，能够有效提高结核感染的诊断率，并降低漏诊和误诊的风险，值得在临床实践中推广。

参考文献：

[1] 廉娟雯， 党丽云， 许家玲， 等. 结核感染T 细胞斑点试验在恶性肿瘤并发结核病患者中的应用价值[J].中国防痨杂志 ，2018，40（4）：353-357.

[3] 郑歌 ， 韩冉 ， 寿好长 ， 等 . 结核感染 T 细胞斑点试验、结核分枝杆菌核酸恒温扩增检测及腺苷脱氨酶联合检测在结核性胸腔积液诊断中的价值 [J]. 新乡医学院学报 ，2024，41（10）：952-956.

[4] 刘佳栋 ， 汪宏良 ， 朱杰稳 ， 等 . 结核抗体、结核杆菌培养联合结核感染 T 细胞监测对肿瘤患者合并结核感染的指导意义 [J]. 临床肺科杂志 ，2019，24（4）：592-595.

[5] 张伟 . 结核抗体、结核感染 T 细胞斑点试验 （T-SPOT.TB） 及痰涂片、痰培养联合诊断活动性肺结核的实践价值 [J]. 工业微生物 ，2024，54（4）：144-146.

[6] 刘小寒 . 结核感染 T 细胞 γ 干扰素释放试验及结核杆菌抗体在肺结核患者诊断中的应用 [J]. 中外医学研究 ，2024，22（1）：67-70.

项目：南通市科学技术局项目编号 ：MSZ2023137

课题名称：TB-IGRA、GeneXpert 联合结核感染T 细胞监测对肿瘤患者合并结核感染的指导意义

作者简介：朱红梅，女，如皋人，汉族，1983 年 11 月生，本科，主管检验师，研究方向：免疫方向

通讯

作者简介：王琳，女，江苏如皋人，汉族，1983 年 11 月生，本科，副主任技师，研究方向：病原微生物学，邮箱：375909059@qq.com