基于ELISA法的新冠血浆制备全流程抗体效价监测：白细胞滤除-灭活-冻存的多工艺联合分析

【摘要】目的：分析白细胞滤除、灭活、冻存等工艺对新冠血浆中特异性IgG、IgM抗体效价的影响，为优化制备流程提供依据。方法：选取2023年1-8月清远430人份献血者样本，经多阶段分层随机抽样，采用ELISA法检测抗体水平，结合白细胞滤除、亚甲蓝灭活、冻存（普通/新鲜冰冻）等工艺处理，通过SPSS分析数据（P<0.05为差异有统计学意义）。结果：血浆灭活前后IgG抗体OD值差异显著，但效价无统计学差异。结论：白细胞滤除、冻存对IgG抗体效价无显著影响；亚甲蓝灭活虽改变IgG抗体OD值，但不影响效价等级。提示需综合工艺影响优化流程以保留高效价抗体。

【关键词】ELISA法；新冠血浆；抗体效价；白细胞滤除；灭活；冻存；多工艺联合分析

新型冠状病毒疫情威胁全球公共卫生，新冠康复者恢复期血浆（CP）中的特异性抗体具有治疗价值，抗体效价是关键指标。ELISA法因高灵敏度等特点常用于抗体检测。新冠血浆制备包含白细胞滤除、灭活、冻存等步骤，不同工艺可能影响抗体活性（如灭活可能损伤抗体结构）。此外，献血人群特征、康复时期也会导致抗体水平差异。本研究旨在优化制备流程，提升高效价血浆利用率，助力疫情防控。

1.对象与方法

1.对象

选取2023年1-8月清远市区430人份献血者血液样本（含不同职业献血者及新冠康复者），采用多阶段分层随机抽样。按康复时期分短期组（康复15天-2个月，50份）和长期组（康复5-6个月，50份）；按处理工艺分亚甲蓝灭活组（50份，检测灭活前后抗体）、冻存组（新鲜/普通冰冻血浆各50份）、去白细胞组（30份，检测滤除前后抗体）。康复者诊断依据国家诊疗方案，结合核酸检测等确诊。

1.2方法

1.2.1对照组处理方式

按常规流程处理，仅做基础质量检测（符合GB18469-2012标准），2-6℃保存≤24小时后，用ELISA法检测IgG、IgM抗体水平作为基线。

1.2.2观察组处理方式

观察组分别采用单一工艺或多工艺联合处理，依次进行白细胞滤除→亚甲蓝灭活→冻存（FP/FFP），各环节衔接≤30分钟。所有处理前后均用ELISA法检测抗体，间隔≤2小时。

1.3观察指标

1.3.1抗体水平检测指标

采用双抗体夹心ELISA法（试剂盒：北京万泰生物），严格按照说明书操作，采用ELISA检测结果吸光度OD值的高低判断抗体水平。

1.3.2高效价血浆判定指标

参照《新型冠状病毒肺炎恢复期血浆临床治疗方案（试行第三版）》，高效价血浆定义为：

① IgG抗体定性阳性且160倍稀释后检测仍为阳性反应；

② 总抗体定性阳性且320倍稀释后检测仍为阳性反应。

③ 检测时同步设置阴性对照（健康人血浆）、阳性对照（已知效价血浆，效价1：1280）及空白对照（PBS缓冲液），批内CV≤10%、批间CV≤15%。

1.3.3工艺联合影响指标

重点监测：（1）单一工艺处理前后IgG抗体OD值的变化；（2）多工艺联合处理后IgG抗体效价保留率（联合处理后效价/初始效价×100%）；（3）新鲜冰冻血浆与冰冻血浆抗体水平的变化（OD值变异系数）。

1.4统计学方法

采用SPSS26.0软件分析，计量资料以x±s或M（P25，P75）表示，组间比较采用配对t检验或Wilcoxon符号秩检验；计数资料以率（%）表示，采用卡方检验。多工艺联合效应分析采用双因素方差分析，主效应及交互效应检验水准均为α=0.05。

2.结果

2.1单一工艺对抗体效价的影响

新冠血浆经不同工艺处理后，IgG抗体效价及指标变化如表1所示。

2.2多工艺联合对抗体效价的影响

结果显示，白细胞滤除→亚甲蓝灭活联合处理的IgG抗体效价保留率显著高于直接灭活组；全流程联合处理中，新鲜冰冻血浆组与普通冰冻血浆组的效价保留率差异无统计学意义。

3.讨论

从单一工艺来看，白细胞滤除后IgG抗体OD值及效价保留率无显著变化（P=0.926），这与既往研究中“白细胞去除不影响血浆抗体活性”的结论一致。其机制可能在于白细胞滤除主要针对细胞成分，而抗体作为可溶性蛋白未被截留，提示该工艺可常规用于降低输血不良反应，且不影响抗体疗效。亚甲蓝灭活虽使IgG抗体OD值出现统计学差异（P=0.006），但效价等级分布未受显著影响，推测亚甲蓝的光化学反应仅轻微改变抗体分子构象，未破坏抗原结合位点，这与亚甲蓝灭活在其他病毒抗体保留中的表现一致[3]。冻存工艺中，FP与FFP的抗体稳定性无差异（P=0.494），说明两种冻存方式均可满足短期储存需求，为血浆库存管理提供了灵活性。多工艺联合分析显示，白细胞滤除→亚甲蓝灭活的效价保留率显著高于直接灭活（96.3%vs92.5%，P=0.002），提示白细胞滤除可能通过减少细胞碎片对灭活体系的干扰，间接保护抗体活性[5]。全流程联合处理中，FP与FFP的效价保留率接近（P=0.122），进一步验证了冻存工艺对抗体稳定性的低影响。

参考文献

[1]王一凡，胡松，于瑶，等.血浆前清蛋白对老年新冠肺炎病人并发呼吸衰竭影响[J].青岛大学学报（医学版），2024，60（05）：701-704.

[2]周帅.维持性血液透析患者血浆ACE2/ACE和TMPRSS2测定及新冠病毒感染风险的个体化评估[D].河北医科大学，2024.DOI：10.27111/d.cnki.ghyku.2024.000553.

[3]姬涛，宋玉祥，张恒，等.新冠肺炎康复者血浆治疗非霍奇金淋巴瘤化疗后并发新冠肺炎3例效果[J].中华医院感染学杂志，2024，34（02）：191-195.

[4]胡欣，徐华，冯娜，等.新冠病毒感染患者恢复期血浆抗体效价的相关因素分析[J].中国输血杂志，2023，36（09）：774-776.DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2023.09.004.

[5]周志军，岳胜兰，彭焱，等.新冠病毒奥密克戎株感染前后血浆中的抗体变化与分布[J].中国输血杂志，2023，36（07）：578-583.DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2023.07.005.

作者简介：虢娟，女，1972年1月出生，本科学历，民族：汉；籍贯：湖南益阳人；职称：输血技术副主任技师。研究方向：主要从事血液检测和输血研究；