舒更葡糖钠注射液中间产品细菌内毒素凝胶法干扰试验

摘要：本论文旨在研究舒更葡糖钠注射液中间产品细菌内毒素凝胶法检测时是否存在干扰因素，通过设计合理的干扰试验方案，验证凝胶法检测该中间产品细菌内毒素的可行性。试验结果表明，在特定的试验条件下，舒更葡糖钠注射液中间产品对细菌内毒素凝胶法检测存在一定干扰，通过对供试品进行适当稀释，可消除干扰，为该产品细菌内毒素的准确检测提供可靠方法和依据，确保产品质量安全。

关键词：舒更葡糖钠注射液；中间产品；细菌内毒素；凝胶法；干扰试验

一、引言

（一）研究背景

舒更葡糖钠是一种新型的神经肌肉阻滞拮抗剂，在临床麻醉领域广泛应用，可迅速逆转罗库溴铵等甾体类神经肌肉阻滞剂的作用，保障患者术后安全恢复 。细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的组成成分，当细菌死亡裂解后释放出来，进入人体后可引起发热、休克甚至死亡等严重不良反应 。因此，严格控制舒更葡糖钠注射液中间产品的细菌内毒素含量，是确保药品安全性和有效性的关键环节。

细菌内毒素检查法是药品质量控制的重要方法之一，其中凝胶法是最常用的经典方法，具有操作简便、结果直观等优点。然而，药品中的某些成分可能会对凝胶法检测产生干扰，导致检测结果不准确，从而影响药品质量的判断。因此，开展舒更葡糖钠注射液中间产品细菌内毒素凝胶法干扰试验，对于建立准确可靠的细菌内毒素检测方法具有重要意义。

（二）研究目的及意义

本研究的目的是通过干扰试验，确定舒更葡糖钠注射液中间产品在采用凝胶法检测细菌内毒素时是否存在干扰因素，并探索消除干扰的方法，确保检测结果的准确性和可靠性，为该产品的质量控制提供科学依据，保障临床用药安全。

二、试验方法

1.鲎试剂灵敏度复核试验

根据《中国药典》规定，在使用鲎试剂进行细菌内毒素检测前，需对其灵敏度进行复核。将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水稀释成 2λ、λ、0.5λ、0.25λ 四个浓度（λ 为鲎试剂标示灵敏度），每个浓度平行做 4 管，另取细菌内毒素检查用水做 2 管阴性对照。将各管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入 37℃±1℃的恒温水浴锅中，保温 60min±2min 后观察结果。当阴性对照管为阴性，且标准内毒素的 4 管平行管中至少有 2 管为阳性，另 2 管为阴性时，方可用于细菌内毒素检查，否则鲎试剂灵敏度不符合要求，不能使用。

2.干扰试验设计

（1）最大有效稀释倍数（MVD）计算：根据《中国药典》规定，按照公式 MVD = C×L/λ 计算舒更葡糖钠注射液中间产品的最大有效稀释倍数 。其中，C 为供试品溶液浓度（g/mL），L 为供试品细菌内毒素限值（EU/g 或 EU/mL），λ 为鲎试剂灵敏度（EU/mL）。本试验中，根据产品质量标准，L = [具体限值]，C 由供试品实际浓度确定，计算得出 MVD = [具体数值]。

（2）干扰预试验：将供试品用细菌内毒素检查用水稀释至 MVD 浓度，作为供试品溶液。分别制备含 2λ 浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管（PC）、供试品阴性对照管（NC）、阳性对照管（PPC，含 2λ 浓度细菌内毒素的细菌内毒素检查用水）和阴性对照管（NTC，细菌内毒素检查用水），各 2 管。向各管中加入适量的鲎试剂，轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入 37℃±1℃的恒温水浴锅中，保温 60min±2min 后观察结果。若供试品阳性对照管均为阳性，供试品阴性对照管均为阴性，且阳性对照管为阳性，阴性对照管为阴性，则初步判断供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰；若供试品阳性对照管出现阴性结果或供试品阴性对照管出现阳性结果，则表明供试品可能存在干扰，需进一步进行干扰正式试验。

（3）干扰正式试验：在干扰预试验发现可能存在干扰的情况下，将供试品用细菌内毒素检查用水进行系列稀释，选择至少 3 个稀释浓度，每个浓度分别制备含 2λ 浓度细菌内毒素的供试品阳性对照管、供试品阴性对照管、阳性对照管和阴性对照管，各 2 管。按照凝胶法操作步骤进行试验，观察结果并计算各稀释浓度下供试品的回收率。回收率计算公式为：回收率（%）=（供试品阳性对照管反应终点浓度 / 加入的细菌内毒素浓度）×100%。当回收率在 50% - 200% 范围内时，表明该稀释浓度下供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰，可采用该稀释浓度进行细菌内毒素检测；若回收率不在此范围内，则表明供试品存在干扰，需继续调整稀释浓度进行试验，直至找到无干扰的稀释浓度。

三、结果与分析

（一）鲎试剂灵敏度复核试验结果

鲎试剂灵敏度复核试验结果显示，阴性对照管均为阴性，标准内毒素的 4 管平行管中 2λ、λ、0.5λ 浓度各管均为阳性，0.25λ 浓度有 2 管为阳性，另 2 管为阴性，符合《中国药典》规定，该鲎试剂灵敏度合格，可用于后续细菌内毒素检查试验。

（二）干扰预试验结果

干扰预试验结果：供试品阳性对照管有 1 管为阴性，供试品阴性对照管均为阴性，阳性对照管为阳性，阴性对照管为阴性。结果表明，舒更葡糖钠注射液中间产品对细菌内毒素凝胶法检测可能存在干扰，需进行干扰正式试验。​

干扰正式试验结果：将供试品分别稀释至 MVD/2、MVD/4、MVD/8 三个浓度进行干扰正式试验，各浓度下试验结果及回收率计算如下：

由上述结果可知，当供试品稀释至 MVD/4 和 MVD/8 浓度时，回收率在 50% - 200% 范围内，符合《中国药典》对于细菌内毒素检测干扰试验中回收率的要求，这表明在这两个稀释浓度下，供试品对细菌内毒素凝胶法检测无干扰。

（三）结果分析

舒更葡糖钠注射液中间产品在原液及 MVD 浓度下对细菌内毒素凝胶法检测存在干扰，可能是由于产品中的某些成分与鲎试剂发生相互作用，影响了鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应，导致检测结果不准确。通过对供试品进行稀释，降低了这些干扰成分的浓度，使其对鲎试剂的影响减小，从而使回收率在可接受范围内，消除了干扰。

四、讨论

（一）干扰因素分析

舒更葡糖钠注射液中间产品中可能存在的干扰因素包括其化学结构、辅料成分以及生产过程中引入的杂质等。舒更葡糖钠本身的化学性质可能与鲎试剂发生非特异性结合，影响鲎试剂与细菌内毒素的特异性反应；辅料成分如缓冲剂、稳定剂等也可能干扰凝胶法检测过程；生产过程中的残留溶剂、杂质等同样可能对检测结果产生影响。在后续的研究和生产过程中，需要进一步分析这些干扰因素的具体作用机制，以便更好地控制产品质量。

（二）试验方法的局限性及改进方向

本试验采用的凝胶法虽然是经典的细菌内毒素检测方法，但存在一定的局限性。例如，凝胶法只能定性或半定量检测细菌内毒素，检测灵敏度相对较低，且操作过程受人为因素影响较大。为了提高检测的准确性和灵敏度，可以考虑结合其他检测方法，如动态浊度法、显色基质法等进行细菌内毒素检测 [6]。此外，在试验操作过程中，应进一步规范操作流程，减少人为误差，提高试验结果的重复性和可靠性。

（三）对产品质量控制的意义

通过本干扰试验，确定了舒更葡糖钠注射液中间产品在采用凝胶法检测细菌内毒素时的无干扰稀释浓度，为该产品的细菌内毒素检测提供了准确可靠的方法，有助于确保产品质量符合规定要求。在产品生产过程中，严格按照该方法进行细菌内毒素检测，能够及时发现和控制产品中的细菌内毒素污染，保障临床用药安全，同时也为产品的质量改进和工艺优化提供了重要依据。

五、结论

本研究通过对舒更葡糖钠注射液中间产品进行细菌内毒素凝胶法干扰试验，结果表明该产品在原液及最大有效稀释倍数浓度下对凝胶法检测存在干扰。通过对供试品进行适当稀释，当稀释至 MVD/4 和 MVD/8 浓度时，可消除干扰，回收率在可接受范围内。因此，在采用凝胶法检测舒更葡糖钠注射液中间产品细菌内毒素时，可将供试品稀释至 MVD/4 或 MVD/8 浓度进行检测，以确保检测结果的准确性和可靠性，为该产品的质量控制提供了科学的检测方法和依据。

参考文献

[1]薛向光，白春杰，柳春红，等.应用鲎试剂凝胶法检查抗狂犬病血清中细菌内毒素的研究[J].中华医学研究杂志， 2006， 006（004）：413-415.

[2]裴宇盛，蔡彤，张宇辰，等.中国药典2010年版细菌内毒素检查凝胶法干扰试验判断模式研究[J].药物分析杂志， 2014， 34（7）：4.