HPLC法测定长春西汀注射液中维生素C的有关物质

【摘要】目的 建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定长春西汀注射液中维生素C的关物质，方法 采用Venusil C18（4.6×250mm，5µm）；以0.2mol/L醋酸铵溶液-乙腈（40：60）为流动相；流速为每分钟0.8ml；检测波长为280nm。结果 维生素C与相关杂质均分离度良好；维生素C与5-羟甲基糠醛、2-糠醛的线性范围分别为，0.23～1.14µg/ml、1.07～3.20µg/ml和1.17～3.50µg/ml，r均＞0.999，方法准确度均大于98.0%。结论 本方法简便、准确、迅速、可用于长春西汀注射液中维生素C的有关物质测 。

【关键词】维生素C；有关物质；HPLC法

由于维生素C在长春西汀注射液中作为辅料使用，主要是起抗氧化的作用，保证长春西汀在生产贮存过程中的质量稳定性，但长春西汀注射液在生产过程中维生素C产生了降解产物，且在长春西汀注射液的长期留样中，维生素C的含量随着留样时间的长短而下降，为了对空白辅料所产生的降解产物进行进一步的研究，保证长春西汀注射液质量标准的严谨性、有效性和可控性，对长春西汀注射液中的抗氧剂维生素C的降解产物进行相应研究，为长春西汀注射液质量控制提供可靠的依据。

1.材料

1.1.仪器 LC-15C、SPD-15C、SIL-10A（日本岛津）、LC-20AT、SPD-M20A、SIL-20A（日本岛津）、紫外-可见分光光度计（TU-1810ASPC）、CP214万分之一电子天平、DV215CD十万分之一电子天平。

1.2.试药与试剂 2-糠醛（来原：MOLCOO；批号：A013001；含量：98.5%）、5-羟甲基糠醛（来原：中检院；批号：11626-201610；含量：99.2%）、维生素C对照品（来原：中检院；批号：100425-201504；含量：100.0%）；乙腈（色谱纯），醋酸铵（分析纯），纯化水

2.方法与结果

2.1.色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Venusil C18，4.6×250mm，5μm或效能相当的色谱柱）；以0.2mol/L醋酸铵溶液-乙腈（40：60）为流动相；流速：0.8ml/min；检测波长为280nm。理论板数按长春西汀峰计算不低于3000。

2.2.系统适用性试验

取维生素C、2-糠醛、5-羟甲基糠醛对照品各适量，用流动相溶解并稀释制成每1ml中分别含1mg、2μg、2μg的混合溶液，摇匀。精密量取系统适用性试验溶液20µl注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.3.辅料干扰试验

溶剂峰与维生素C主峰重合，但溶剂峰峰面积微小，几乎不影响自身对照溶液的峰面积，可忽略不计；空白辅料中各峰与维生素C峰、5-羟甲基糠醛峰、2-糠醛峰均能完全分离，不影响已知杂质5-羟甲基糠醛和2-糠醛的含量测定。

2.4.检测限与量限限

取维生素C、2-糠醛、5-羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成一定浓度的溶液，再用0.01mol/L盐酸逐级稀释后进样20µl，记录色谱图，按信噪比S/N≈3/1确定检测限，按信噪比S/N≈10/1确定定量限。

维生素C、2-糠醛、5-羟甲基糠醛的检测限分别为0.08ng、0.04ng、0.03ng；定量限分别1.28ng、0.29ng、0.26ng。

2.5.溶液稳定性

维生素C对照溶液、2-糠醛、5-羟甲基糠醛杂质对照品溶液在室温条件放置8小时，峰面积的RSD值分别为0.44%、0.61%和0.96%；供试品溶液在在室温条件放置8小时，未知杂质、2-糠醛、5-羟甲基糠醛含量及杂质总量的RSD值分别为1.39%、0.59%、0.95%和0.68%；溶液稳定性良好。

2.6.精密度试验

2-糠醛、5-羟甲基糠醛杂质对照品溶液连续进样6次峰面积的RSD值分别为0.32%和0.26%；重复性试验中，单个杂质、2-糠醛、5-羟甲基糠醛含量和杂质总量分别为0.27%、0.43%、0.39%和1.26%，RSD值分别为2.28%、0.41%、0.78%和0.93%；中间精密度单个杂质、2-糠醛、5-羟甲基糠醛含量和杂质总量分别为0.24%、0.41%、0.38%和1.19%，RSD值分别为4.14%、0.38%、0.10%和1.79%；精密度良好。

2.7.线性关系

维生素C在0.23～1.14µg/ml浓度范围内，线性方程为Y=94505.8X-3328.0、相关系数r为0.9999，峰面积与浓度成良好的线性关系；5-羟甲基糠醛在1.07～3.20µg/ml浓度范围内，线性方程为Y=206152X+3865.3、相关系数r为0.9997，峰面积与浓度成良好的线性关系、2-糠醛在1.17～3.50µg/ml浓度范围内，线性方程为Y=164018.0X+1702.2、相关系数r为0.9997，峰面积与浓度成良好的线性关系。

2.8.回收率

5-羟甲基糠醛回收率在95.3％～103.0％之间，平均回收率为99.2%，RSD值为3.37%；2-糠醛94.5％～101.9％之间，平均回收率为98.0%，RSD值为3.03%；满足药品质量分析方法验证指导原则规定的回收率限度92.0％～105.0％；回收率结果良好。

2.9.样品测定

3.讨论

通过检测波长的选择可知，维生素C、2-糠醛、5-羟甲基糠醛的最大吸收波分分别为267nm、273nm和282nm，选择280nm作为长春西汀注射液中抗氧剂维生素C有关物质的测定波长；

建立的有关物质测定方法专属性强，灵敏度高，精密度和准确度及耐用性良好。

参考文献

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